免疫组化对组织固定的要求
固定的意义是保存组织细胞的抗原性,使抗原物质不发生弥散和抗原性丧失。越来越多的研究及实验数据表明,不标准的组织固定是导致免疫组织化学结果不准确的主要因素。
常规固定必须使用 3.7%中性缓冲甲醛(pH 7.2~7.4)。组织离体后应尽可能在 30~60 min 内开始固定。延迟固定引起的蛋白质降解可导致背景非特异性着色增加,减弱免疫组织化学的染色强度。
固定不均匀将会导致免疫反应的异质性;而固定过度(固定时间>72 h)或固定不足(固定时间<6 h)会导致免疫反应性降低或完全丧失、干扰免疫活性。标准条件为组织规范剖开后置于不少于自身体积 4~10 倍的中性缓冲甲醛固定液中,依据组织大小,固定时间为 6~48 h,对于活检小组织固定时间亦不应少于 6 h。固定不足是目前病理科应高度重视的问题。
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