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景世元

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景世元

副主任医师

北京中医药大学东直门医院 神经外科

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景世元医生介绍
专业擅长
周围性面瘫、儿童及成人脑胶质瘤、脑膜瘤、脑出血、脑梗死、颅内动脉无症状狭窄、颅脑外伤,儿童蛛网膜囊肿,脊髓栓系等
个人简介
景世元(男,1981年生,籍贯:山东济南),博士研究生(河北医科大学),副主任医师,现在首都医科大学三博脑科医院博士后流动站,中华医师协会神经外科分会学组委员、神经外科专科医师。从事神经外科临床工作11年;第一作者发表SCI文章2篇、北大核心期刊文章5篇;获得河北科技进步二等奖1项、河北省卫计委一等奖1项;目前主持厅局级科研课题2项(匹配科研经费6万)。
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科普文章

文章 摘要

【摘要】目的探讨下调 LncRNA CRNDE 基因表达对 MAPK/ERK 通路及转录因子中相关基因的影响。 方法将 CRNDE 基因干扰 siRNA 转染人胶质瘤 U251 细胞系,并同时设置空白组及对照组,利用 Real Time PCR 检测细胞系中 MAPK/ERK 通路及转录因子中相关基因表达量的变化。 结果与空白组及对照组相比,转染组(si783、si809 )中相关基因 NF-κB、MEK 2、ERK1、ERK2、c-Myc、Raf1 表达量均明显下降(P<0.05 ),具有统计学意义。 结论 CRNDE 可能通过调节 MAPK/ERK 通路中及转录因子中一系列相关基因表达,增加胶质瘤细胞的增殖和迁移能力,同时抑制细胞凋亡。 【关键词】结直肠癌差异表达长链非编码 RNA;MAPK/ERK 通路;增殖;凋亡;迁移 前 言 CRNDE(colorectal neoplasia differentially expressed )是结直肠癌差异表达长链非编码 RNA,它在许多肿瘤组织中出现异常表达[1-2],尤其是在胶质瘤中上调 14~32 倍[3],从而推断 CRNDE 可能在胶质瘤演变过程中发挥重要功能。 为探讨下调 LncRNA CRNDE 基因表达对 MAPK/ERK 通路及转录因子中相关基因的影响,我们进行 U251 细胞的 siRNA 干扰,利用 Real Time PCR 检测细胞系中 MAPK/ERK 通路及转录因子中相关基因表达量的变化,进一步分析 CRNDE 对胶质瘤细胞增殖和迁移以及凋亡的影响。 资料与方法 1 临床资料 1.1 试剂与耗材 人脑胶质细胞瘤 U251(来源于胶质母细胞瘤 WHOIV 级)购自江苏齐氏生物科技有限公司。 试剂名称 生产厂家 CCK8 试剂盒 BEYOTIME Lipofectamine2000 INVITROGEN Annexin-VFITC/PI 细胞凋亡试剂盒 SOLARBIO transwell 小室 CONING U251 细胞株 ATCC DMEM 培养基 HYCLONE 胎牛血清 HYCLONE 青霉素 SIGMA 链霉素 SIGMA 谷氨酰胺 SIGMA 0.25%胰蛋白酶 SIGMA 台盼蓝 SIGMA DMSO SIGMA 1.2 U251 细胞的复苏与培养 将人脑胶质细胞瘤 U251 经过细胞复苏、细胞传代及细胞冻存等步骤完成。 1.3 CRNDE 干扰 siRNA 及目的基因引物序列的设计 1.4 转染 细胞用含 10%胎牛血清的 DMEM 培养基,37℃、5%CO2 培养箱中培养、传代。转染前 24h,弃去培养基,加 PBS 洗 3 遍,加入 0.25 胰酶,37℃消化至待细胞回缩变圆,加终止液终止消化,1000r/min 离心 10min,弃上清,用不加双抗的完全培养基重悬,接种在六孔板中,每孔 0.5-2×105 个细胞,待细胞汇合度为 60%-80%。取三种 siRNA 各取 100pmol,稀释于 250Ml Opti-MEM 培养基,将 5μl Lipofecta- mine 2000 稀释于 250μlOpti- MEM 培养基,混匀室温放置 5min,将两管混合放置 20min。将六孔板内培养基弃掉,PBS 洗 2 遍,每孔加 1.5 mLOpti-MEM 培养基,将上述混合液加入相应孔。 我们将转染入无关序列 NC 的细胞作为阴性对照组;将未转染入任何序列的细胞作为空白组。 1.5 Real time PCR 检测 我们首先进行 CRNDE 引物设计 F: AAATCAAAGTGCTCGAGTG GTR: ACCTTCTTCTGCGTGACAAC。利用 Trizol 提取未转染及转染 CRNDE siRNA 的细胞总 RNA。将 1μg 总 RNA 反转录为 cDNA,基因组 DNA 的除去及反转录反应采用 TIANScript RT KIT 试剂盒(天根生物科技有限公司)。Real-time PCR 反应体系参考 SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)说明书,SuperReal PreMix Plus10μl,FW Primer 0.6μl,RV Primer 0.6μl,cDNA 模板 100ng,RNase-Free ddH2O 7.4μl。利用荧光定量 PCR 仪(Applied Biosystems)仪器进行实时定量 PCR,反应条件: 95℃ 30s;95℃ 5s,53℃ 20s,72℃ 20s,延伸阶段收集荧光信号,40 个循环;55℃-95℃绘制熔解曲线。结束后确认 Real-time PCR 的扩增曲线和熔解曲线,每个样本重复三遍。利用 2-ΔΔCt 法计算目标基因的相对表达量。 结 果 1、对 U251 细胞 siRNA 干扰效率的验证(图 1) 利用 siRNA 在胶质瘤细胞 U251 中进行干扰,24、48h 后进行提取细胞内总 RNA,经过逆转录后进行 CRNDE 的 PCR 检测。si783、si809 干扰组在转染 24h 后 CRNDE 表达量为对照组的 8.6%和 12.6%;48h 后 CRNDE 表达量为对照组的 11.4%和 18.5%,均有统计学意义(P<0.05)。说明在转染 24、48h 后,si783、si809 对靶基因 CRNDE 表达干扰效果良好。 2、si783、si809 干扰 CRNDE 表达对相关目的基因表达的影响 我们对相关目的基因表达水平进行 PCR 分析,结果显示 Raf1、MEK2、ERK1、ERK2、c-Myc、NF-κB 的 RNA 表达量均有不同程度下降。Raf1 基因表达水平在 si783、si809 干扰组中分别下降为对照组的 31.7%和 72.2%;MEK2 基因表达水平降低为对照组的 31.3%和 41.9%;ERK1 基因表达水平降至对照组的 60.4%和 48.2%;ERK2 基因表达水平降至对照组 75.3%和 70.4%;与干扰组相比,si783、si809 干扰组中 NF-κB 表达水平降至 39.9%和 69.4%,c-Myc 表达水平降至 36.1%和 47.3%。

景世元

副主任医师

北京中医药大学东直门医院

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问诊记录

车祸后出现头疼,CT检查显示硬膜下积液,住院治疗23天后出院,一个月后复查发现脑梗塞,想知道是否与车祸有关?患者男性68岁

就诊科室:神经外科

总交流次数:9

医生建议:考虑到您在车祸后出现了头疼和硬膜下积液,且复查发现有脑梗塞,这可能与车祸有关。建议您继续接受治疗,包括使用抗血小板药物和抗凝药物来预防血栓再形成。同时,改善生活方式也很重要,如戒烟、控制血压和血糖等。关于保险报销问题,建议您联系保险公司了解具体的报销政策。

景世元

副主任医师

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我被诊断出面肌痉挛,伴有脸部跳动,想了解手术后神经恢复的可能性和面瘫的风险。患者女性22岁

就诊科室:神经外科

总交流次数:28

医生建议:面肌痉挛是一种常见的神经系统疾病,手术可以有效缓解症状,但神经恢复的可能性因人而异。手术前需要进行核磁共振检查以明确责任动脉。手术后,需要遵循医生的建议进行康复训练,避免过度用力和刺激。同时,保持良好的生活习惯和心态也对康复有帮助。

景世元

副主任医师

北京中医药大学东直门医院

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我父亲因颅内出血接受手术后出现癫痫,已服药五年但仍有发作,想知道是否可以通过手术根治?患者男性33岁

就诊科室:神经外科

总交流次数:12

医生建议:对于术后出现的癫痫,需要根据具体情况制定个性化的治疗计划。除了药物治疗外,非手术治疗方法如神经调节疗法或康复训练也值得考虑。同时,生活方式的改变也非常重要,包括保持良好的睡眠习惯、避免过度疲劳、控制饮食等。定期复查和监测癫痫的发作情况是必要的,家人和朋友的支持也非常关键。

景世元

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北京中医药大学东直门医院

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病人在重症室里,出现大量出血,医生建议可能需要切喉咙,想了解治疗和预后的情况。患者男性66岁

就诊科室:神经外科

总交流次数:17

医生建议:对于脑出血患者,需要密切观察病情,特别是是否有脑水肿等并发症。治疗上,可能需要使用抗凝药物或其他药物,具体取决于病情。生活上,保持呼吸道通畅、定期翻身等都是非常重要的。同时,家属也需要做好心理准备,积极配合医生的治疗和护理工作。

景世元

副主任医师

北京中医药大学东直门医院

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我在车祸中受伤,做了多次CT检查,担心是否会有永久性的意识障碍。患者男性57岁

就诊科室:神经外科

总交流次数:16

医生建议:根据CT结果和你的症状,蛛网膜下腔出血的诊断是明确的。目前看来,你的意识障碍在逐渐恢复,这是一个积极的信号。请继续服用医生开具的药物,并遵循他们的治疗建议。同时,保持良好的生活习惯,包括充足的休息和健康的饮食。这些都将有助于你的恢复。

景世元

副主任医师

北京中医药大学东直门医院

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我昨天下午头部撞击床头,右侧靠后部位,已有19小时,目前无严重症状,但有隐疼感,担心是否为慢性出血。患者男性25岁

就诊科室:神经外科

总交流次数:11

医生建议:根据您的描述,目前不需要立即就医。然而,需要密切关注是否有新的症状出现,如恶心、呕吐、视力模糊、意识模糊等。请多休息,避免剧烈运动和劳累。如果情况没有改善或有恶化趋势,应及时就医。

景世元

副主任医师

北京中医药大学东直门医院

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景世元医生寄语
做一个有温度的医生,为患者解除病痛,抚慰患者的心痛。
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