宝宝发生便秘比较常见，90%以上属于功能便秘，也就是与药物、胃肠道发育异常、内分泌疾病等疾病无关的便秘。便秘并非只是排便次数减少。功能性便秘有诊断标准（目前按照罗马IV标准）。
婴幼儿便秘是一种常见病症，指大便干硬，或先硬后烂，隔时较久，有时排便困难。看着孩子排便时涨红的小脸，小屁屁一努一努就是不见“出大恭”，大人常常急出一头汗。宝宝便秘大多是功能性性便秘，占 90%以上，多因结肠吸收水分电解质增多引起。仅有少部分是体格与生理异常比如先天性巨结肠、肛门狭窄等引起。为什么会出现便秘呢？
1. 摄入不足：宝宝进食太少时，消化后液体吸收余渣少，致大便减少、变稠。奶中糖量不足时肠蠕动弱，可使大便干燥。长期摄入不足引起营养不良，腹肌和肠肌张力减低，甚至萎缩，收缩力减弱，形成恶性循环，加重便秘。
2. 饮食结构不当：大便性质和食物成分关系密切。如食物中碳水化合物不足，含大量蛋白质，肠道菌群继发改变，肠内容发酵过程少，大便易呈碱性，干燥；如食物中含较多的碳水化合物，肠道发酵菌增多，发酵产酸增多，大便呈酸性，次数多而软；如食入脂肪和碳水化物都高，则大便润利。如进食大量钙化酪蛋白，粪便中含多量不能溶解的钙皂，粪便增多，且易便秘。食物中纤维素太少，钙剂的补充也易发生便秘。
3. 作息不规律： 7 月宝宝每日作息时间应逐渐规律，逐渐培养规律饮食及按时排便习惯，排便属于反射性的生理反应，婴儿的排便习惯培养十分的重要。可以尝试晨起或进行喂养后，将婴儿放置在排便椅或者排便盆上，可以培养婴儿排便习惯，对婴儿便秘的治疗有很大的帮助。不规律作息会让宝宝生物钟紊乱，也会引起便秘或腹泻。
4. 其他：运动量不足，食物过敏，肠动力功能障碍，家族性便秘，精神因素如环境和生活习惯的突然改变也可引起短时间的便秘。
面对恼人的便秘，调整饮食增加膳食纤维的摄入，腹部按摩促进胃肠蠕动，借助开塞露等油剂解除排便带来的痛苦，逐渐培养排便习惯，我们就会和便秘说拜拜。
奶瓣、泡沫、粘液，孩子的便便是个健康晴雨表
今天的文章有些"重"，但却是新手爸妈的必修课。
自从当了爸妈，每天观察宝宝便便简直成了雷打不动的活动。宝宝拉绿色的便便，正常吗？大便里有血点、血丝是怎么回事？大便里有奶瓣、粘液、泡沫是咋回事？为啥孩子有时候一天拉好几次，有时候又好几天不拉呢？
今天，咱们就来看看关于宝宝便便的那些事儿。
1. 认识宝宝各时期的正常便便
新生儿的胎便
根据新生儿体质不同，宝宝排便的时间也不尽相同，但一般都会在出生12小时内排便，呈墨绿色或黑色、粘稠状，无臭味。
通常这种便便也被称为胎便，若孩子早产，则胎便较少。这是因为早产儿肠蠕动乏力，且胎便排出会延迟，但如若超24小时仍未排便，则需排除宝宝消化道畸形的问题。
通常，胎便会在3-4天内排完，且随着时间增长，胎便的颜色逐渐变黄。
纯母乳喂养时，宝宝的大便特点
正常来说，纯母乳喂养的宝宝，大便呈软膏状，多为淡黄色，也有少数呈淡绿色，偶尔可见奶瓣，气味不明显，有时也略带酸味。因母乳易消化吸收，所以，宝宝常常出现一天十次大便或十天一次大便的情况，其实这都是正常的。
混合喂养或配方奶粉喂养时候，宝宝的大便特点
混合喂养的宝宝，大便通常呈黄色或绿色，可见到奶瓣，气味不明显，或略带酸臭味。配方奶粉喂养宝宝时，宝宝的大便呈泥状，多为金黄色，少数为绿色，也可见到奶瓣，气味不明显，或略带臭味。通常来说，奶粉喂养或混合喂养的宝宝，每天的大便次数比纯母乳喂养的要少，1-4次算正常。
添加辅食后，宝宝的大便特征
随着宝宝辅食的增多，他们的大便也逐渐成型，颜色变为黄色或褐色，当宝宝吃入某种食物时，宝宝的便便也可呈现出食物的颜色。可见到食物颗粒，有臭味。排便次数不固定，一般一天1次或一天3次。
2. 宝宝的大便中为什么会出现这些东西
从上文可以看出，无论是母乳喂养的宝宝，还是混合喂养的宝宝，亦或是添加辅食后的宝宝，都会出现大便中带奶瓣、食物颗粒等现象。但其实，便便中出现不同东西也是有不同原因的。
· 大便中带有奶瓣
便便中带有奶瓣（白色颗粒状、小块状或瓣状物）的现象在宝宝中特别常见，这是因为宝宝的胃酸把母乳或奶粉中的蛋白质变成了凝乳，但肠道却没能把凝乳完全消化。这种奶瓣现象在3月龄以下的宝宝中较为常见，通常多出现在奶粉喂养的孩子里，但也不排除母乳喂养的宝宝会出现。
· 大便中带有泡沫
除了奶瓣外，便便中带有泡沫也是常见现象。不过常见未必代表正常，一般来说，带泡沫的便便说明大便中含有气体，是糖分在大肠中发酵形成的结果。除了气体外，糖分发酵还会产生酸味。排出这类便便的宝宝，多数都乳糖不耐受，可在专业人士指导下使用乳糖酶治疗。
· 大便中带有粘液
大便中带有粘液的现象对于多数人来说也是正常现象，因为正常情况下人类大便中都会带有粘液，粘液是肠道黏膜中的分泌物，可防止异物进入肠粘膜细胞，也有润滑肠道的作用。若宝宝大便中偶尔出现粘液，且饮食、精神状况都正常，则无需担心。但若在排出粘液大便的同时，便中还伴有腥臭味的脓血，且孩子腹痛、呕吐，则必须及时就医。
此外，宝宝便秘时也会出现大便中带粘液的现象，这是肠道在发挥它的"自卫"功能。
3. 不正常的大便长这样
· 白色大便
便便之所以呈现不同颜色，是因为胆汁中的胆红素给大便染了色，若出现白色便便现象，则说明宝宝的大便没被染色，需要就医以确定宝宝是否存在胆道功能异常、梗阻的可能性。
· 红色大便
红色大便会被很多家长认为是肠道出血症状，但其实不同的红色便便还不太一样。如果是肠道下段出血，则便便与血液是混合的，所以，观察大便时若发现不光表面有血，内部也一样呈现红色或暗红色，则很有可能是肠道下段出血。如果是肛门出血，则通常只有大便表面带血，且呈鲜红色。
· 黑色大便
红色大便可能是肠道下段出血导致，那么黑色大便则可能是上消化道大量出血导致。因所出血液在肠道停留时间久，红细胞遭到破坏，血红蛋白中的铁在肠道里跟硫化物产生反应，所以便便就变黑了，这种情况一定要去就医。
不过，也有黑色大便和红色大便并不是不正常的大便，很多家长给孩子补铁后也会出现黑黄色大便，孩子吃红心火龙果或其他红色食物后，也会出现红色便便现象。所以，要注意观察宝宝的精神状态和饮食状态，再进行具体判断。
4. 宝宝便秘怎么办？
便便的特性我们大约都知道了，但困扰家长的一个大问题我们还没解决，那就是宝宝便秘怎么办？其实，宝宝便秘与肠道内肠道细菌及纤维素变少相关，一般来说，缓解方法有二：
其一，在医生的指导下使用开塞露、乳果糖、聚乙二醇等来缓解便秘，或助力宝宝排便。
其二，采用食物调理的方法来进行调节。这种时候，首先要注意水分的摄入，但水分摄入不单纯指多喝水，因为白开水进入人体后，很快便排出了，对软化大便效果不大。所以，家长可以在饮食上多下功夫，多给宝宝进食粥汤、奶类等。
此外，增加宝宝肠道内的纤维素也非常必要，让宝宝多吃带皮苹果、牛油果、胡萝卜、豌豆、黄瓜等，都是不错的选择。当然，最重要的一点就是从宝宝的主食上来调整，日常我们推荐给宝宝选择好消化的绵羊奶粉，一般来说，绵羊奶脂肪球比牛奶的要小，且脂肪球是由短链脂肪酸组成，小分子结构更易于宝宝娇嫩肠胃的吸收。有相关数据显示，绵羊奶粉消化吸收率是牛奶的3倍。
除了消化吸收问题外，宝宝便秘的另一个原因则是上火，而绵羊奶粉的β酪蛋白属于A2同类蛋白，A2 β酪蛋白在消化过程中不易生产β酪啡肽（BCM-7），因此更亲和自然，不易上火，不易过敏。家长们不知道该选择什么品牌的绵羊奶粉，那么可参考全羊乳配方的标准，选择奶源地和口碑都更好的，像是来自世界黄金奶源带新西兰的原罐进口蓝河绵羊奶粉就不错，不含牛乳成分，奶源和奶粉质量都很有保障。
虽说宝宝无小事，但掌握了观察宝宝大便的方法和知识，家长们也是可以轻松应对宝宝的消化问题和成长问题的！
“宝宝便秘了！”这是最让很多家长着急和忧心的一件事了。便秘对身体的危害是相当大的，它首先会导致宝宝肚胀，严重会导致孩子肠胃功能乱，影响宝宝生长发育和智力发育，到底宝宝便秘是因为冬季上火，还是其他问题。。所以，每个家长都应该极度重视这个问题，从根源着手，找方法避免，才会让宝宝远离便秘带来的困扰!
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如何导致便秘
1生病
有的孩子患有甲状腺功能减退等疾病，会使大便不易排出。有的也会因结肠症导致便秘。因疾病造成的便秘，家长要格外重视，应该及时的带宝宝去正规医院就诊，治好病症，便秘自然就会消失。
2缺乏性排便
粪便干结，宝宝在排便时会比较疼，久而久之，宝宝会因为怕疼拒绝排便，这是一个恶性循环的问题，家长一定要重视。在宝宝排便困难时，可借助开塞露帮助宝宝排便，但是不能长期依赖此方法，还是要锻炼宝宝自主排便。切不可对药物产生依赖。
3辅食添加
刚开始加辅食也会引起宝宝的便秘，一直都是吃母乳的宝宝在刚开始吃辅食会引起便秘，这是一个习惯的过程，妈妈们也可不必担心，可适当的给宝宝喂食点水来缓解。
4进食过少
宝宝便秘时，消化功能退化，食欲不振。粪便在结肠中停留，停留的越久，水分吸收的越多，粪便越不容易排出。
5饮食不合理
家长们都很注重宝宝的营养，总觉得多补营养宝宝才会更健康，但是补得越多孩子肠胃功能差，消化不了，时间一长，就会引起便秘。
便秘预防建议
1多喝水，一定要多喝水，因为水分不充足时，不管使用哪种方法预防便秘，都是无济于事的。应该每隔两个小时就给宝宝水分的摄入。
2尤其还在母乳喂养的宝宝一定养重视了，妈妈的饮食决定了宝宝的营养摄入，所以，建议妈妈一定要吃清淡的饮食，多喝水。这样，宝宝便秘的几率会降低很多。
3给宝宝做按摩
按摩是当下最流行的科学方式了，预防宝宝便秘可在宝宝腹部进行顺时针按摩，每天两次，每次10分钟左右。
4多吃水果，蔬菜
蔬菜、水果营养丰富，多食用可以有效的预防便秘，
为了宝宝的健康，应防止便秘，引导宝宝养成定时排便的习惯，不要“憋”便，有了便意就要立刻入厕。
说到便秘，估计很多人都深有体会。因为平时饮食习惯不健康，导致排便成为众多人的一大难题。但其实，这个烦恼不止大人有，宝宝也有！
据相关数据统计显示，中国城市儿童（12岁以下）有便秘情况的占比超过19.8%，也就是说每5个儿童中就有一个便秘患儿。而国外资料显示儿童便秘的发生率达3%-8%，其中绝大多数都属于功能性便秘。
儿童出现功能性便秘的主要原因有五：
一是盆底肌肉协调障碍；
二是胃肠激素分泌和调控异常，影响了胃肠蠕动；
三是膳食纤维摄入不足；
四是肠道微生态菌群絮乱；
五是不良的排便习惯。
很多人都觉得便秘不过是大便干燥，排便困难，算不了什么大事儿。但其实，便秘可能会给孩子的身体带来极大的伤害。
（1）肛裂
约有25%的便秘患儿有肛裂的迹象。
小儿便秘时，其肛门及肛管所承受的压力过大，就会导致肛门撕裂出血。肛裂后，排便会更成难题，而粪便水分会在肠道中被吸收，大便更加干结，从而恶性循环下去，情况更严重。
（2）影响智力发育
专家指出，大肠中的细菌能够将肠道中未能被消化的蛋白质分解成氨、硫化氢等等对人体有危害的物质。经常便秘，有害菌所产生的有害物质会因为无法被排出而被肠道吸收，如果超出肝脏的解毒能力，就会损害神经，使得儿童智力受损、记忆力下降、思维迟缓等等。
（3）影响身体发育
反复便秘，会让肠道的消化和吸收功能逐渐退化，不仅营养无法及时送往全身，大肠杆菌还会在肠道内大量繁殖，产生的有害物质会逐渐侵袭孩子身体的各大器官。
长期便秘的儿童，很容易出现营养不良、贫血等症状。
（4）遗尿
长时间膨胀的直肠会压迫膀胱，导致膀胱的容量减少。这样反复刺激膀胱，膀胱会不受控制的收缩，容易导致遗尿。
如果不及时治疗便秘，儿童可能会出现巨结肠病，严重影响健康甚至威胁到生命！
除这些之外，便秘还可能会导致儿童免疫力下降、出现多动症等等。总之，孩子便秘不是小事，家长们一定要因此引起重视。在这里，给各位家长一些健康建议~
1、少让孩子吃这些食物
精白面包、婴儿米粉、还未熟透的香蕉、苹果、胡萝卜和牛奶等等，这些都容易导致便秘。
2、增加膳食纤维
可以在辅食中多添加一些李子、梨、豌豆、西兰花等等高纤维素食品。
3、多喝水
多喝水可以帮助宝宝软化大便。
希望每个小天使都能远离便秘烦恼~
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儿童便秘：粪便久积于肠道，就会再次发酵，产生大量有毒物质，如不能及时排出体外，就可能对人的神经系统产生不良影响。宿便轻则令人嗜睡、口臭、口舌干燥、头痛、腹胀，重则引起心血管、肝肾等内脏疾病及风湿性关节炎，甚至引发肠癌。对儿童来说，宿便会降低脑功能，影响孩子智力发育。
如何判断儿童便秘？
孩子如果持续有四天或四天以上不大便，而在大便时，其粪便相当硬，在这种情况下，才应该认定孩子是发生了便秘的毛病。据统计，我国城市儿童(12岁以下)便秘者占19.8%，也就是说，大约每5个孩子中就有一个被便秘折磨。
诱发儿童便秘的饮食因素
便秘是儿童时期较为常见的一种疾病，我们知道诱发该病的原因有很多，饮食因素就是其中的一种，那么，诱发儿童便秘的饮食因素有哪些呢?针对这个问题，来为大家做一个详细的介绍，希望能够帮到大家。
(1)饮食不足。婴儿进食量太少，经过消化后的余渣就少，大便自然减少。奶中糖不足，可使大便干燥。长期饮食不足，则形成营养不良，此时腹肌和肠肌瘦弱，张力低下，推动力减少，形成恶性循环，导致便秘。
(2)食物成分不适宜。食物中蛋白质多，碳水化合物不足，肠内分解蛋白质的细菌比发酵菌多。肠内发酵菌少，大便就呈碱性，干燥，排便次数就相应减少。如果碳水化合物多，肠道发酵菌多，发酵产生的酸性物质增加，大便就可软化。如食物中脂肪多，碳水化合物也多，则大便湿润易排出。婴儿喂牛奶多，肠腔中钙化酪蛋白较多，形成钙皂使大便多而干燥。
食物纤维可促进肠蠕动，缩短肠内容物通过肠道的时间，在大肠中起渗透作用，增加粪便的体积和水分。儿童吃蔬菜、水果少，摄入的食物纤维就不足，促使大便干燥而难以排出。
水分是体内自备的润滑剂，足够的水分有利于大便的软化。尤其是用牛奶喂养的小儿，多补充水分才能避免便秘。
(3)肠道功能失常。生活不规律，缺乏排便训练，不能形成排便的条件反射，不能按时大便而形成便秘。常用泻药或开塞露、体力活动少、患慢性疾病(如佝偻病、呆小病)、生活环境突然改变等，均可影响肠道的功能而引起便秘。此外，肛门直肠的疾病也可引起排便疼痛或排便困难，而导致便秘，如尿布疹、肛门裂、先天性巨结肠等病。
诱发儿童便秘的饮食因素如上所述，希望家长要引起重视。在日常生活中，家长要让儿童远离诱发该病的一些病因。
冻卵，受到了越来越多的关注。但你对冻卵女性了解有多少？她们年龄多大？冻卵后她们又如何使用的？通过1篇荟萃分析我们来一起揭秘。
一、研究方法
研究人员按照系统综述和荟萃分析的首选报告项目（PRISMA）建议进行了系统综述。他们搜索了 PubMed、Scopus 和 Web of Science 从建库到 2021 年 1 月的文献，对发表日期没有限制。纳入的研究需为英文，且研究了计划性冻卵的使用者或潜在使用者的特征、最初信息来源以及卵子处置情况。提取的数据通过主题分析进行分析，纳入研究的方法学质量使用 QualSyst 标准进行评估。
二、研究结果
- 研究筛选情况
- 最初检索到 1074 条记录，其中 29 项研究符合纳入标准，包括 12 项定性研究和 17 项定量研究。调查的回复率在 38% - 85% 之间。
- 女性特征
- 计划性冻卵的使用者或潜在使用者大多为单身、受过高等教育、有工作，平均年龄为 37 岁。
- 信息来源
- 媒体和朋友是计划性冻卵最初知识的最常见来源，而健康专业人员则是较不常见的来源。
- 卵子使用情况
- 大多数计划性冻卵者没有尝试使用冷冻卵子怀孕，但她们并不后悔进行了该过程。
三、讨论与启示
- 人口特征与卵子使用
- 计划性冻卵的大多数使用者或潜在使用者具有特定的人口统计学特征，并且最终大多没有使用她们冷冻保存的卵子。这可能是由于多种原因，比如在冻卵后的生活中，她们的生育计划发生了改变，或者虽然有生育的想法但尚未尝试使用冷冻卵子。
- 卵子处置的选择
- 对于未使用的卵子，存在多种处置方式。可以选择丢弃，这可能是因为女性认为自己不再需要这些卵子，或者缺乏合适的使用途径。也可以选择捐赠给其他女性，为那些有生育困难的女性提供帮助。此外，还可以捐赠给研究机构，用于相关的科学研究，以推动生育医学的发展。
- 对健康专业人员的指导意义
- 了解计划性冻卵潜在使用者的主要特征，健康专业人员可以更加主动地宣传正确的冻卵知识，包括冻卵的风险、成功率以及后续可能面临的问题等。同时，在咨询过程中，也可以根据女性的年龄、婚姻状况和生育计划等因素，提供更加个性化的建议，帮助她们做出更有效的决策。
参考来源：Giannopapa M, Sakellaridi A, Pana A, Velonaki VS. Women Electing Oocyte Cryopreservation: Characteristics, Information Sources, and Oocyte Disposition: A Systematic Review. J Midwifery Womens Health. 2022 Mar;67(2):178-201. doi: 10.1111/jmwh.13332. Epub 2022 Feb 13. PMID: 35156301.
原始卵泡位于卵巢皮质中，处于静止状态。其数量在出生时就已确定（每个卵巢大约 60 万到 100 万个），并在儿童期和整个生育期持续逐渐减少，因为原始卵泡会被募集并离开静止状态。
大多数原始卵泡在初次募集后发生闭锁，无法达到窦状卵泡阶段，只有少数能继续生长直至排卵，在生育期大约排卵 450 次左右，只有极少数卵泡能发育成有受精能力的卵子。当原始卵泡几乎耗尽，只剩下大约 1000 个原始卵泡时，就会导致绝经。
随着女性生育观念的转变以及医学技术的飞速发展，冻卵技术作为一种生育力保存的手段，正逐渐走进大众的视野。这一技术为女性在面临生育挑战时提供了一种可能的解决方案，无论是因为职业发展、个人生活规划，还是由于疾病治疗等原因导致的生育延迟或生育风险增加。
一、冻卵技术的原理与方法
冻卵技术的核心原理是在极低的温度下保存卵子，使其代谢活动几乎停止，从而延长卵子的存活时间。目前主要有两种常见的冻卵方法：慢冻法和玻璃化冷冻法。
慢冻法是一种较为传统的方法，它通过逐步降低温度，让卵子在这个过程中逐渐适应低温环境。在这个过程中，会使用一些冷冻保护剂来减少冰晶的形成，因为冰晶可能会对卵子的结构造成损伤。具体来说，卵子首先在含有一定浓度冷冻保护剂的溶液中进行预处理，然后以相对缓慢的速度降温，经过多个阶段的温度调控，最终将卵子储存于液氮中，温度可达 -196°C。
玻璃化冷冻法则是一种更为先进的技术，它能够在更短的时间内实现卵子的冷冻。这种方法使用了更高浓度的冷冻保护剂，并且通过极快的冷却速度，使卵子在瞬间从液态转变为一种类似玻璃的固态，从而避免了冰晶的形成。玻璃化冷冻法在保护卵子的结构和功能方面具有一定的优势，因此近年来受到了越来越多的关注和应用。
二、冻卵技术的适用人群与临床应用
- 癌症患者的生育力保存 对于许多癌症患者，尤其是年轻女性，化疗、放疗等治疗手段可能会对卵巢功能造成不可逆的损害，导致生育能力丧失。冻卵技术为这些患者提供了在接受治疗前保存生育能力的机会。例如，在一些血液系统癌症或生殖系统癌症的治疗中，医生会建议患者在开始治疗前考虑冻卵。通过采集卵子并进行冷冻保存，患者在治愈癌症后，如果有生育的意愿，就有可能使用这些冷冻的卵子尝试受孕。
- 延迟生育的女性 随着社会的发展，越来越多的女性选择在事业有成之后再考虑生育问题。然而，女性的生育能力会随着年龄的增长而逐渐下降，尤其是在 35 岁之后，这种下降趋势更为明显。冻卵技术为这些希望延迟生育的女性提供了一种保障。她们可以在年轻、生育能力较强的时候将卵子冷冻保存，等到合适的时机再尝试受孕。
三、冻卵技术的临床效果与影响因素
- 卵子的存活率和受精率 冻卵技术的临床效果受到多种因素的影响。从卵子的存活率和受精率来看，不同的研究报道结果有所差异。一般来说，玻璃化冷冻法在卵子存活率和受精率方面可能表现出一定的优势。一些研究显示，玻璃化冷冻法的卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右；而慢冻法的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率在 60% - 70% 左右。然而，这些数据并不是绝对的，实际的存活率和受精率还会受到卵子本身的质量、冷冻保护剂的使用、冷冻和解冻的操作过程等多种因素的影响。
- 怀孕率和活产率 冻卵后的怀孕率和活产率也是衡量技术效果的重要指标。随着技术的不断发展，冻卵后的怀孕率和活产率也在逐步提高。例如，慢冻法的活产率从早期的较低水平逐渐上升，从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 20，02 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2004 年之前的 29.4% 提高到 2004 年之后的 39%。但需要注意的是，怀孕率和活产率还与女性的年龄、身体状况、受孕环境等多种因素密切相关。
冻卵技术作为一种新兴的生育力保存手段，为女性的生育选择提供了更多的可能性。然而，我们也应该清醒地认识到，这项技术仍然处于不断发展和完善的过程中，面临着诸多技术挑战和伦理法律问题。只有通过不断的研究和探索，才能使冻卵技术更好地服务于女性的生育健康，为更多女性实现生育梦想提供有力的支持。
参考文献：Cacciottola L, Donnez J, Dolmans MM. Ovarian tissue and oocyte cryopreservation prior to iatrogenic premature ovarian insufficiency. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2022 May;81:119-133. doi: 10.1016/j.bpobgyn.2021.09.010. Epub 2021 Nov 15. PMID: 34887172.
在当今社会，女性面临着多种可能影响生育能力的因素，如癌症治疗、延迟生育等。因此，生育力保存成为了一个重要的研究领域，而冻卵技术作为其中的一种方法，正逐渐受到关注。其目的在于为面临生育风险的女性提供一种保存生育能力的选择，以便在未来需要时能够实现生育梦想。
冻卵技术的原理
为了长期保存细胞的活性，需要将细胞置于极低的温度下，使其进入一种类似于 “暂停生命活动” 的状态。对于哺乳动物细胞来说，通常使用的储存温度是 -196°C（液氮的温度）。在这个温度下，水呈固态，生物反应停止，对冻存细胞的主要威胁被认为是背景辐射对 DNA 造成的损伤。
然而，冻卵过程中最关键的是要避免在温度变化过程中对卵子造成损伤。当水冷却到冰点以下时会形成冰晶，冰晶的体积比液态水大，会对细胞内的细胞器造成压力和剪切力，导致细胞受损。因此，避免冰晶形成是成功冻卵的首要目标。此外，随着水的冻结，溶质被排除在固体之外，会使剩余未冻结溶液的溶质浓度升高，对细胞内蛋白质产生毒性，避免这种溶液效应是第二个目标。在解冻过程中，如果升温缓慢，会有自由水解冻和再结晶的危险，而快速升温则可能导致细胞外渗透压突然下降，引起自由水快速流入细胞，造成细胞肿胀和损伤，即渗透压冲击，避免这种情况是第三个目标。
为了实现这些目标，所有成功的冻卵方法都使用了一种叫做冷冻保护剂的化学物质。冷冻保护剂分为渗透性和非渗透性两类。渗透性冷冻保护剂是小分子物质，能够穿透细胞膜，与水分子形成氢键，防止冰晶形成，并在一定浓度下可使水形成玻璃化状态（一种固态但不膨胀的状态）。常用的渗透性冷冻保护剂有丙二醇（PROH）等。非渗透性冷冻保护剂则留在细胞外，通过从细胞内吸取自由水来使细胞内空间脱水，从而增加渗透性冷冻保护剂在细胞内的浓度，进一步协助防止冰晶形成。在解冻过程中，非渗透性冷冻保护剂还可以防止因细胞内冷冻保护剂不能快速扩散出去而导致的渗透压冲击，常用的非渗透性冷冻保护剂有蔗糖等。
冻卵的方法
- 慢冻法（Slow - Freeze）
- 慢冻法在卵子仍处于代谢状态时使用较低的初始冷冻保护剂浓度，以降低毒性。冷冻保护剂通常在室温下添加，然后温度逐渐降低（约 2°C/min）到 -6°C 的播种温度。在这个温度下，通过用冰冷的器械触碰冻存容器的外部，引入一个小冰晶作为种子，诱导溶液中的冰晶形成。然后溶液在这个温度下保持一段时间（如 10 - 30 分钟）以达到平衡，之后温度再逐渐降低到 -32°C。在这个过程中，冰晶在细胞外介质中逐渐生长，冷冻保护剂浓度逐渐增加，特别是在细胞内空间，通过非渗透性冷冻保护剂进一步脱水。最后将冷冻容器投入液氮中。
- 在解冻时，为了防止冰晶再结晶，需要快速升温，但要注意避免渗透性冷冻保护剂在细胞内高浓度引起的渗透压冲击，因此需要使用额外的非渗透性冷冻保护剂。随着渗透性冷冻保护剂逐渐从卵子中扩散出来，非渗透性冷冻保护剂的浓度逐渐降低，直到卵子被放回标准培养基中。
- 快速冷冻法（Vitrification）
- 快速冷冻法（玻璃化冷冻）在室温下向细胞中添加高浓度的渗透性冷冻保护剂，由于这种高浓度的冷冻保护剂毒性较大，卵子不能在这个温度下长时间停留。经过短暂的平衡后，卵子直接投入液氮中。为了进一步防止冰晶形成，使用极快的冷却速度。在解冻时，也需要极快的升温速度以防止冰晶再结晶。
冻卵技术的临床应用
- 癌症患者的生育力保存
- 对于新诊断出癌症且面临绝育治疗的女性来说，冻卵是一种保存生育能力的方法。化疗和放疗等癌症治疗方法可能会导致卵巢功能衰竭，而冻卵可以在治疗前进行。例如，卵巢皮质含有大量原始卵泡，可以通过腹腔镜采集卵巢皮质，然后进行冻存。或者也可以采集处于生发泡阶段的卵子进行冻存，尽管生发泡卵子的体外成熟技术还不太可靠。
- 在癌症患者中使用冻卵技术也存在一些问题，如刺激卵泡和采集卵子所需的时间可能会延迟癌症治疗，而且对于患有全身性或播散性恶性肿瘤的患者，移植冻存的卵巢组织需要谨慎，因为可能存在残留的恶性细胞。
- 延迟生育
- 随着社会的发展，越来越多的女性选择延迟生育。由于年龄的增长会导致生育能力下降，冻卵为这些女性提供了一种在年轻时保存卵子的方法，以便在未来想要生育时使用。然而，目前对于冻卵技术在延迟生育方面的应用，还缺乏长期的数据，例如需要冻存多少卵子才能实现满意的怀孕率还不确定。
- 伦理问题及其他应用
- 冻卵技术为那些反对胚胎冷冻保存的夫妇提供了一种选择，也可以用于一些胚胎冷冻保存不合法的国家。此外，冻卵还可以用于卵子捐赠，通过冻存捐赠者的卵子，可以解决传统卵子捐赠中存在的一些问题，如捐赠者的可用性、成本、同步捐赠者和接受者的日程安排等。
冻卵技术的临床结果
- 存活率和受精率
- 不同的研究报道了不同的卵子存活率和受精率。例如，一些研究使用慢冻法报道的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率 60% - 70% 左右；而使用玻璃化冷冻法报道的卵子存活率和受精率可能更高，如一些研究中卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右。
- 怀孕率和活产率
- 从临床结果来看，冻卵后的怀孕率和活产率也在不断提高。慢冻法的活产率从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 2002 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2005 年之前的 29.4% 提高到 2005 年之后的 39%。同时，冻卵后的流产率也呈现出随着活产率提高而下降的趋势。
参考文献：Jain JK, Paulson RJ. Oocyte cryopreservation. Fertil Steril. 2006 Oct;86(4 Suppl):1037-46. doi: 10.1016/j.fertnstert.2006.07.1478. PMID: 17008147.
在人类辅助生殖领域，冷冻保存技术是一项非常重要的技术手段。它包括精子、胚胎和卵母细胞的冷冻保存。研究表明，精子和胚胎的冷冻保存已经成为常规操作，卵母细胞的冷冻保存也正逐渐在临床实践中得到更广泛的应用。
胚胎冷冻保存降低了新鲜胚胎移植的数量，提高了体外受精（IVF）周期的有效性。数据显示，同时进行新鲜胚胎和冷冻胚胎移植的女性，通过使用冷冻胚胎可获得额外 8% 的生育机会。卵母细胞冷冻保存相较于胚胎冷冻有更多优势，比如为因肿瘤治疗或慢性疾病面临生育力丧失风险的女性保存生育能力、用于卵子捐赠以及推迟生育等，还能避免胚胎冷冻所涉及的宗教和伦理道德问题。
冷冻保存技术的基本原理和方法
- 传统缓慢降温法
- 冷冻保护剂的作用
- 在胚胎和卵母细胞的冷冻保存过程中，防止冰晶形成和有毒溶质浓度过高是关键，这两者是导致细胞死亡的主要原因。为了实现这一点，细胞悬浮的冷冻溶液中需要添加冷冻保护剂（CPA）。CPA 分为细胞内 / 膜渗透性（如丙二醇、二甲基亚砜、甘油、乙二醇等）和细胞外 / 膜非渗透性化合物（如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、蛋白质、脂蛋白等）。渗透性 CPA 通过渗透梯度置换水分，部分占据细胞内水的位置，而非渗透性 CPA 则增加细胞外渗透压，在冷冻前支持细胞脱水，解冻后防止水分快速进入细胞。
- 不同阶段的处理
- 对于人类胚胎和卵母细胞，在缓慢降温前，通常会让其暴露于渗透性和非渗透性 CPA 的混合物中 10 分钟进行脱水。对于早期卵裂阶段的胚胎和卵母细胞，常用低浓度的丙二醇（1.5M）和蔗糖（0.1 - 0.25 - 0.5M），而囊胚阶段的胚胎则常用甘油。以最初成功的小鼠和牛胚胎冷冻保存协议为例，是将胚胎以 - 0.3°C - 0.5°C/min 的缓慢降温速率冷却到 - 80°C - 120°C，但这个过程很长（几个小时）。后来有了改进的方法，如将绵羊和牛胚胎以 0.3°C/min 的速率缓慢冷却到 - 30 - 35°C 后，再浸入液氮中，大大缩短了冷冻过程（1.0 - 1.5 小时）。人类胚胎一般是以 0.3°C/min 的低冷却速率冷却到约 - 30°C - 40°C，然后以 - 50°C/min 的速率增加冷却到 - 80°C - 150°C 后再浸入液氮中。在缓慢降温过程中，手动在 5 到 - 8°C 之间诱导冰晶成核（播种），缓慢冷却到 - 30°C - 40°C 后再快速冷却到 - 196°C 的胚胎 / 卵母细胞，需要在 25°C - 37°C 的温水中快速解冻，然后逐步去除 CPA 进行细胞再水化。
- 冷冻保护剂的作用
- 玻璃化（超快速冷冻保存）法
- 技术原理
- 玻璃化是一种不同于缓慢降温的冷冻保存方法，它是在低温下通过极端提高粘度使溶液固化，避免冰晶在细胞内和细胞外空间形成。这是通过高浓度的 CPA（4 - 8mol/L）和极高（超快速）的冷却速率实现的。在玻璃化过程中，细胞主要在超快速冷却开始前通过暴露于高浓度的 CPA 进行脱水，以获得玻璃化的细胞内和细胞外状态。但玻璃化过程中 CPA 的高浓度可能对细胞有毒性，不过可以通过混合不同的 CPA 来降低每种 CPA 的相对浓度，并将胚胎 / 卵母细胞暴露于溶液的时间减到最少来控制毒性。
- 操作要点
- 用于玻璃化的冷冻溶液由渗透性（如 EG、G、DMSO、PG、乙酰胺等）和非渗透性（如蔗糖、海藻糖等）试剂组成，有些协议还会补充大分子物质如聚乙二醇等。为了提高冷却速率，胚胎 / 卵母细胞玻璃化的溶液体积已被大幅减小（0.1 - 2μL），并开发了特殊的载体系统，如开放式拉伸吸管、Flexipet - 剥脱移液器、Cryotop 等。玻璃化技术操作难度较大，因为胚胎 / 卵母细胞必须在极短时间（<1min）内处理非常浓缩、粘稠且体积小的玻璃化溶液，所以操作人员需要经过良好的培训。
- 技术原理
人类胚胎和卵母细胞冷冻保存的实践经验及安全性
- 胚胎冷冻保存的实践经验
- 不同阶段的效果
- 对于人类胚胎冷冻保存，早期卵裂阶段胚胎解冻后至少保留一半初始卵裂球被认为是存活的。在一项大型多中心研究中，14000 个早期卵裂阶段缓慢冷冻和解冻的胚胎中，73% 的胚胎至少有一半初始卵裂球仍然完整，移植后的临床妊娠率和着床率分别为 16% 和 8.4%。对于囊胚冷冻保存，常用甘油和蔗糖的组合作为冷冻溶液，报道的内细胞团和滋养层细胞至少 50% 存活的存活率在 69% - 98% 之间，着床率在 16% - 30% 左右。早期卵裂阶段人类胚胎已成功在多种基于 DMSO、EG 等的溶液中玻璃化，存活率约 60% - 80%，且有多个妊娠 / 分娩案例。囊胚玻璃化常用 EG 和 DMSO 的混合物作为溶液，报道的总体存活率在 70% - 99% 之间，着床率在 20% - 50% 左右。
- 不同方法的比较
- 在一些比较研究中，发现玻璃化和缓慢降温在胚胎存活和着床率方面各有优劣。例如，在某些情况下玻璃化的卵裂阶段和囊胚阶段胚胎解冻后存活率较高，但在有经验的群体中，玻璃化并不比缓慢降温有更高的怀孕概率。
- 不同阶段的效果
- 卵母细胞冷冻保存的实践经验
- 不同方法的影响
- 在缓慢冷冻卵母细胞方面，提高蔗糖浓度（从 0.1M 到 0.3M）可以提高脱水率以及 MII 卵母细胞的存活率和受精率。改变 CPA 的平衡温度、冰晶成核和将胚胎浸入液氮的操作，以及用胆碱替代钠或直接向卵母细胞细胞质中注射蔗糖等方法都能提高卵母细胞的存活率。但缓慢冷却的卵母细胞相对于新鲜对照组发育较慢。在玻璃化卵母细胞方面，常用的玻璃化溶液由渗透性（2.7M EG 和 2.1M DMSO）和非渗透性 CPA（0.5M 蔗糖）组成，改进的玻璃化技术提高了玻璃化人类卵母细胞解冻后的存活率和受精率，与新鲜对照卵母细胞相当。
- 不同方法的影响
参考文献：Konc J, Kanyó K, Kriston R, Somoskői B, Cseh S. Cryopreservation of embryos and oocytes in human assisted reproduction. Biomed Res Int. 2014;2014:307268. doi: 10.1155/2014/307268. Epub 2014 Mar 23. PMID: 24779007; PMCID: PMC3980916.
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