当患者突然出现胸部剧烈的疼痛，或者是憋闷时，或者是像胸部被绳子捆紧，或者是砖头压榨的感觉时，可能是患有心绞痛发作。这时应立马调整体位，保持比较缓和舒适的姿势，并保持安静，可以先松开领带、皮带、纽扣，让病人坐下或者是半卧位，等待阵痛过去。要保证室内空气流通，温度适当，安抚病人，使其精神稳定下来。
如果患者脸色苍白，出现休克症状时，立马拨打 120 叫救护车。
当患者采取比较缓解的姿势后，胸痛症状虽然缓解，但仍然得上医院进行检查和治疗。当患者心绞痛复发时，可以备常用药物，将医生配给的硝酸甘油，含在舌头下面一粒，切勿吞服，约三到四分钟起效。如服药无效，要怀疑心肌梗塞的可能，应该立马叫 120 救护车送至医院，心绞痛病人随身常备心绞痛药物，是十分必要的。
抗心绞痛药物
1. 硝酸酯类和 B 阻滞剂
这种合用治疗典型劳累型心绞痛会很有效，相加作用主要来自相互阻断对心肌耗氧量的不良作用，B 阻滞剂取消硝酸酯引起的反射性心动过速和心肌收缩力增强。硝酸酯通过扩大静脉容积而减弱 B 阻滞剂引起的左心室舒张末期容积增加。硝酸酯还可以减弱因阻断 B 肾上腺素能受体而引起的冠状血管阻力增高。但应注意的是硝酸酯类和 B 阻滞剂合用时，剂量应减少，尤其是开始剂量，以防体位性低血压。B 阻滞剂停药时应逐步减量，突然停药可能诱发心肌梗死。
2. 钙通道阻滞剂和 B 受体阻滞剂
如心绞痛不能因硝酸酯和一种 B 受体阻滞剂控制，加钙通道阻滞剂有时可以有用，特别时有冠状动脉痉挛时。如果病人已经在用最大剂量的维拉帕米或地尔硫卓，难以证明 B 阻滞剂的任何相加作用，而且，过渡的心动过缓、心脏阻滞、心力衰竭可能发生。但若是用二氢吡啶治疗，例如硝苯地平，或是用硝酸酯治疗，则有明显的反射性心动过速，从而限制这些制剂的效应。在这些情况下，加用 B 阻滞剂可减慢心率，降低血压，可能是有益的。
3. 钙通道阻滞剂加硝酸酯
对严重的劳累型或血管痉挛性心绞痛，一种硝酸酯和一种钙通道阻滞剂合用比单用其中任何一种有更好治疗效应。因硝酸酯主要降低前负荷，而钙通道阻滞剂主要降低后负荷，两者对心肌耗氧量的于伴有心力衰竭、病窦综合症、房室传导阻滞的劳累型心绞痛，但可能有过度心动过速。硝酸酯和钙通道阻滞剂及 B 阻滞剂合用不适用这种情况。
4. 钙通道阻滞剂、B 阻滞剂和硝酸酯
二氢吡啶类和硝酸酯类可扩张心外膜冠状血管、二氢吡啶类降低后负荷 ，硝酸酯类降低前负荷，B 阻断药减慢心率和减弱心肌收缩力，因此他们的合用无论是理论上还是临床实践上，都表明有显著的有益作用。因此对于使用两种不同类别的抗心绞痛药物合并治疗而仍不能控制的劳累型心绞痛，可使用这三类抗心绞痛药物而可能有效。当然这种合用引起的不良反应会显著增加。在这种合用中，只有二氢吡啶类适合和 B 阻断药合用，而维拉帕米和地尔硫卓不适合。
心绞痛为老年人的多发病、常见病，当出现心绞痛时，应当采取什么样的措施能够帮助患者缓解不舒适的症状，避免恶性事件发生呢？今天我们浅谈一下心绞痛的急救方法。
当心绞痛发作的时候，建议患者应当立即停止手边的工作，就近坐下来，保持休息状态，最好是可以平躺。然后让患者舌下含服丹参滴丸，或者是硝酸甘油或者是救心丸，如果服用硝酸甘油的话，那么建议最好是一次舌下含服一粒，不要服用过多，因为硝酸甘油可能会引发血压下降。一次性含服过多的话，可能会使患者血压降低。一般来讲，先舌下含服一粒，如果症状不缓解，过五分钟之后再含服一粒，最多不超过三粒。如果含服药物之后，症状未见明显缓解，那么建议患者及早拨打120。观测血压和心率，心电图，含服药物不见缓解的话，可以更改用药方式，可以静脉滴注，或者是泵入的方式给药，如果存在心电图的动态演变，那么应当让患者及时嚼服拜阿司匹林，以及波立维、立普妥。同时可以适当的给予吸氧治疗，避免患者活动。如果心率，血压能够耐受的前提之下，患者没有支气管哮喘或者是慢阻肺病史，可以联合服用β受体阻滞剂，临床上常用的有美托洛尔、比索洛尔，相对而言，平片起效会更快一些。入院后可以进行相应的血液化验检查，如果高度怀疑可能是急性心肌梗死的话，可以进行冠脉造影检查。如发病时间窗小于三小时，确诊是急性心肌梗死的话，那么也可以选择静脉溶栓治疗。
心绞痛可大可小，千万不要随意忽视。尤其疼痛时间大于20分钟以上的患者一定要进行积极的检查跟治疗，以免延误时间危及生命。对于已经确诊有冠心病的患者，平日里身边一定要备着急救的药物，相对而言，我个人比较推荐用硝酸甘油。如果心绞痛频繁发作的话，那么一定要去医院进一步明确冠脉血管的狭窄程度，如果确实是存在严重的狭窄，那么建议最好可以及时的做冠脉支架植入治疗。
心绞痛发作时可以表现为心区前压榨性疼痛，或者是憋闷感，疼痛的部位常位于胸骨后部，也可以放射至心前区及左上肢尺侧。这是典型心绞痛患者的临床表现，但是在实际临床当中，还有很多患者的表现并不是很典型，所以说我们就要借助一些辅助检查手段来明确诊断。今天我们浅谈一下心绞痛的检查方法有哪些？
对于疼痛时间较长的患者，首先要进行心电心以及心肌酶学的检查，要排除是否是发生了急性心肌梗死。同时可以进一步检查血常规以及甲状腺功能，因为有的时候心绞痛发作，考虑有可能是由于贫血或者是甲状腺功能异常所诱发的。对于每次心绞痛发作持续时间较短，而且做普通心电图，并未发现明显缺血的异常的患者，让他建议可以行动态心电图检查，以便明确患者在疾病发作时是否存在心肌缺血样改变。心脏彩超的检查有助于鉴别患者心绞痛发作是否是由于瓣膜疾病或者是心肌病所诱发。对于频繁发作心绞痛症状，并且持续时间较长的患者，应当进一步行冠脉ct的检查，这项检查是确诊冠心病的无创检查当中的金标准检查。如果患者伴随心肌酶学的异常，那么必要时还需要结合微创的冠脉造影检查。还有一些检查，目前在临床当中应用并不是很广泛，比如说向正电子发射断层心肌显像，它有助于评估心肌的活力。
我们通过系统的检查，是为了确诊冠心病，心绞痛，以及进一步明确冠心病心绞痛的严重程度，这也是为了指导日后患者的用药。在临床上意义非常重大，因为不同严重程度的病情，进行相应的选择用药的方案就会有所差异。
心绞痛的患者是可以进行运动的，如果患者近期病情不稳定，频繁发作心绞痛症状或者是血管重度狭窄，那么应当积极的先进行冠脉造影检查，如果病情并不是非常危重，那么可以先适当的进行小量运动。对于冠脉血管严重狭窄，或者是病情不稳定的患者，应先行冠脉介入治疗，近期不宜进行运动，先按时服用药物，充分休息即可。
有冠心病，心绞痛的患者，只要病情稳定，还是应当适当的进行运动的，因为只有适当的进行运动，加快人体代谢，可以降低血脂，同时可以更好的控制好血糖、血清尿酸水平、改善脂肪肝，有助于预防动脉硬化的进展。但是如果患者存在严重的冠脉血管狭窄，或者是频繁的心绞痛症状发作的话，那么建议患者要充分休息，同时应当按时服用抗血小板降局稳定斑块，预防心绞痛发作的药物。随着病情的逐渐好转，可以结合慢走，打太极拳，门球这些轻体力活动，同时也有助于病情的恢复。尤其对于发生了急性心肌梗死的患者，要绝对卧床三天，三天以后可以适当的下地在床边活动，逐渐变为在屋内活动，然后可以慢走，但是一定切记不要过于劳累，走几分钟可以结合休息几分钟，劳逸结合。
运动不可以多，也不可以少，过多的运动的话，尤其是重体力劳动，或者是说高强度运动，很有可能会诱发心肌缺血的发作，反而会加重病情，如果平日里由于认为自身有病，而不进行任何运动，那么也会加速病情的进展，长期就会造成高血脂，高血糖，高尿酸血症等。
心绞痛的患者不是必须都需要安放支架的。要根据患者病情严重的程度，以及是否是真正的心绞痛、是否符合安装支架的条件等因素，来决定患者是否需要安装支架。
对于心绞痛的患者，尤其是老龄患者，应当进一步检查一下冠脉ct或者是冠脉造影，这类检查属于确诊冠心病的金标准，可以更加有效的评估患者冠脉血管狭窄的严重程度，根据不同的严重程度来选择治疗方案。至于冠脉血管重度狭窄的患者，应当及时的给予冠脉介入治疗，也就是应当安放支架。但是如果存在左主干合并两支以上冠脉病变，尤其病变复杂程度较高，或者是多支血管病变合并有糖尿病，在患者能够承受开胸手术的前提下，建议患者首选冠脉旁路移植术。
有一些患者可能存在心绞痛的症状，但是经过冠脉ct或者是冠脉造影的检查，患者可能是轻度或者是中度病变，或者是没有任何的问题，或者仅仅是存在冠状动脉肌桥。这种情况下不需要结合冠脉支架治疗，只需要使用药物来改善不舒服的症状就可以了。比如像心肌桥的患者，建议在临床上可以选择像β受体阻滞剂和钙通道阻滞剂来降低心肌收缩力，从而缓解不舒服的症状。β受体阻滞剂的代表性药物有美托洛尔、比索洛尔等。钙通道阻滞剂的代表性药物有地尔硫卓、维拉帕米等。对于轻中度冠脉狭窄的患者，可以给予抗血小板、抗心肌缺血、调脂、抗凝等对症支持治疗。
建议存在心绞痛的患者，最重要的是一定要明确诊断，根据不同的疾病以及疾病严重的程度来给予相应的治疗方案，这才能更好的缓解患者不舒服的症状，改善患者的预后，降低患者的住院率以及死亡率。
冻卵，受到了越来越多的关注。但你对冻卵女性了解有多少？她们年龄多大？冻卵后她们又如何使用的？通过1篇荟萃分析我们来一起揭秘。
一、研究方法
研究人员按照系统综述和荟萃分析的首选报告项目（PRISMA）建议进行了系统综述。他们搜索了 PubMed、Scopus 和 Web of Science 从建库到 2021 年 1 月的文献，对发表日期没有限制。纳入的研究需为英文，且研究了计划性冻卵的使用者或潜在使用者的特征、最初信息来源以及卵子处置情况。提取的数据通过主题分析进行分析，纳入研究的方法学质量使用 QualSyst 标准进行评估。
二、研究结果
- 研究筛选情况
- 最初检索到 1074 条记录，其中 29 项研究符合纳入标准，包括 12 项定性研究和 17 项定量研究。调查的回复率在 38% - 85% 之间。
- 女性特征
- 计划性冻卵的使用者或潜在使用者大多为单身、受过高等教育、有工作，平均年龄为 37 岁。
- 信息来源
- 媒体和朋友是计划性冻卵最初知识的最常见来源，而健康专业人员则是较不常见的来源。
- 卵子使用情况
- 大多数计划性冻卵者没有尝试使用冷冻卵子怀孕，但她们并不后悔进行了该过程。
三、讨论与启示
- 人口特征与卵子使用
- 计划性冻卵的大多数使用者或潜在使用者具有特定的人口统计学特征，并且最终大多没有使用她们冷冻保存的卵子。这可能是由于多种原因，比如在冻卵后的生活中，她们的生育计划发生了改变，或者虽然有生育的想法但尚未尝试使用冷冻卵子。
- 卵子处置的选择
- 对于未使用的卵子，存在多种处置方式。可以选择丢弃，这可能是因为女性认为自己不再需要这些卵子，或者缺乏合适的使用途径。也可以选择捐赠给其他女性，为那些有生育困难的女性提供帮助。此外，还可以捐赠给研究机构，用于相关的科学研究，以推动生育医学的发展。
- 对健康专业人员的指导意义
- 了解计划性冻卵潜在使用者的主要特征，健康专业人员可以更加主动地宣传正确的冻卵知识，包括冻卵的风险、成功率以及后续可能面临的问题等。同时，在咨询过程中，也可以根据女性的年龄、婚姻状况和生育计划等因素，提供更加个性化的建议，帮助她们做出更有效的决策。
参考来源：Giannopapa M, Sakellaridi A, Pana A, Velonaki VS. Women Electing Oocyte Cryopreservation: Characteristics, Information Sources, and Oocyte Disposition: A Systematic Review. J Midwifery Womens Health. 2022 Mar;67(2):178-201. doi: 10.1111/jmwh.13332. Epub 2022 Feb 13. PMID: 35156301.
原始卵泡位于卵巢皮质中，处于静止状态。其数量在出生时就已确定（每个卵巢大约 60 万到 100 万个），并在儿童期和整个生育期持续逐渐减少，因为原始卵泡会被募集并离开静止状态。
大多数原始卵泡在初次募集后发生闭锁，无法达到窦状卵泡阶段，只有少数能继续生长直至排卵，在生育期大约排卵 450 次左右，只有极少数卵泡能发育成有受精能力的卵子。当原始卵泡几乎耗尽，只剩下大约 1000 个原始卵泡时，就会导致绝经。
随着女性生育观念的转变以及医学技术的飞速发展，冻卵技术作为一种生育力保存的手段，正逐渐走进大众的视野。这一技术为女性在面临生育挑战时提供了一种可能的解决方案，无论是因为职业发展、个人生活规划，还是由于疾病治疗等原因导致的生育延迟或生育风险增加。
一、冻卵技术的原理与方法
冻卵技术的核心原理是在极低的温度下保存卵子，使其代谢活动几乎停止，从而延长卵子的存活时间。目前主要有两种常见的冻卵方法：慢冻法和玻璃化冷冻法。
慢冻法是一种较为传统的方法，它通过逐步降低温度，让卵子在这个过程中逐渐适应低温环境。在这个过程中，会使用一些冷冻保护剂来减少冰晶的形成，因为冰晶可能会对卵子的结构造成损伤。具体来说，卵子首先在含有一定浓度冷冻保护剂的溶液中进行预处理，然后以相对缓慢的速度降温，经过多个阶段的温度调控，最终将卵子储存于液氮中，温度可达 -196°C。
玻璃化冷冻法则是一种更为先进的技术，它能够在更短的时间内实现卵子的冷冻。这种方法使用了更高浓度的冷冻保护剂，并且通过极快的冷却速度，使卵子在瞬间从液态转变为一种类似玻璃的固态，从而避免了冰晶的形成。玻璃化冷冻法在保护卵子的结构和功能方面具有一定的优势，因此近年来受到了越来越多的关注和应用。
二、冻卵技术的适用人群与临床应用
- 癌症患者的生育力保存 对于许多癌症患者，尤其是年轻女性，化疗、放疗等治疗手段可能会对卵巢功能造成不可逆的损害，导致生育能力丧失。冻卵技术为这些患者提供了在接受治疗前保存生育能力的机会。例如，在一些血液系统癌症或生殖系统癌症的治疗中，医生会建议患者在开始治疗前考虑冻卵。通过采集卵子并进行冷冻保存，患者在治愈癌症后，如果有生育的意愿，就有可能使用这些冷冻的卵子尝试受孕。
- 延迟生育的女性 随着社会的发展，越来越多的女性选择在事业有成之后再考虑生育问题。然而，女性的生育能力会随着年龄的增长而逐渐下降，尤其是在 35 岁之后，这种下降趋势更为明显。冻卵技术为这些希望延迟生育的女性提供了一种保障。她们可以在年轻、生育能力较强的时候将卵子冷冻保存，等到合适的时机再尝试受孕。
三、冻卵技术的临床效果与影响因素
- 卵子的存活率和受精率 冻卵技术的临床效果受到多种因素的影响。从卵子的存活率和受精率来看，不同的研究报道结果有所差异。一般来说，玻璃化冷冻法在卵子存活率和受精率方面可能表现出一定的优势。一些研究显示，玻璃化冷冻法的卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右；而慢冻法的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率在 60% - 70% 左右。然而，这些数据并不是绝对的，实际的存活率和受精率还会受到卵子本身的质量、冷冻保护剂的使用、冷冻和解冻的操作过程等多种因素的影响。
- 怀孕率和活产率 冻卵后的怀孕率和活产率也是衡量技术效果的重要指标。随着技术的不断发展，冻卵后的怀孕率和活产率也在逐步提高。例如，慢冻法的活产率从早期的较低水平逐渐上升，从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 20，02 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2004 年之前的 29.4% 提高到 2004 年之后的 39%。但需要注意的是，怀孕率和活产率还与女性的年龄、身体状况、受孕环境等多种因素密切相关。
冻卵技术作为一种新兴的生育力保存手段，为女性的生育选择提供了更多的可能性。然而，我们也应该清醒地认识到，这项技术仍然处于不断发展和完善的过程中，面临着诸多技术挑战和伦理法律问题。只有通过不断的研究和探索，才能使冻卵技术更好地服务于女性的生育健康，为更多女性实现生育梦想提供有力的支持。
参考文献：Cacciottola L, Donnez J, Dolmans MM. Ovarian tissue and oocyte cryopreservation prior to iatrogenic premature ovarian insufficiency. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2022 May;81:119-133. doi: 10.1016/j.bpobgyn.2021.09.010. Epub 2021 Nov 15. PMID: 34887172.
在当今社会，女性面临着多种可能影响生育能力的因素，如癌症治疗、延迟生育等。因此，生育力保存成为了一个重要的研究领域，而冻卵技术作为其中的一种方法，正逐渐受到关注。其目的在于为面临生育风险的女性提供一种保存生育能力的选择，以便在未来需要时能够实现生育梦想。
冻卵技术的原理
为了长期保存细胞的活性，需要将细胞置于极低的温度下，使其进入一种类似于 “暂停生命活动” 的状态。对于哺乳动物细胞来说，通常使用的储存温度是 -196°C（液氮的温度）。在这个温度下，水呈固态，生物反应停止，对冻存细胞的主要威胁被认为是背景辐射对 DNA 造成的损伤。
然而，冻卵过程中最关键的是要避免在温度变化过程中对卵子造成损伤。当水冷却到冰点以下时会形成冰晶，冰晶的体积比液态水大，会对细胞内的细胞器造成压力和剪切力，导致细胞受损。因此，避免冰晶形成是成功冻卵的首要目标。此外，随着水的冻结，溶质被排除在固体之外，会使剩余未冻结溶液的溶质浓度升高，对细胞内蛋白质产生毒性，避免这种溶液效应是第二个目标。在解冻过程中，如果升温缓慢，会有自由水解冻和再结晶的危险，而快速升温则可能导致细胞外渗透压突然下降，引起自由水快速流入细胞，造成细胞肿胀和损伤，即渗透压冲击，避免这种情况是第三个目标。
为了实现这些目标，所有成功的冻卵方法都使用了一种叫做冷冻保护剂的化学物质。冷冻保护剂分为渗透性和非渗透性两类。渗透性冷冻保护剂是小分子物质，能够穿透细胞膜，与水分子形成氢键，防止冰晶形成，并在一定浓度下可使水形成玻璃化状态（一种固态但不膨胀的状态）。常用的渗透性冷冻保护剂有丙二醇（PROH）等。非渗透性冷冻保护剂则留在细胞外，通过从细胞内吸取自由水来使细胞内空间脱水，从而增加渗透性冷冻保护剂在细胞内的浓度，进一步协助防止冰晶形成。在解冻过程中，非渗透性冷冻保护剂还可以防止因细胞内冷冻保护剂不能快速扩散出去而导致的渗透压冲击，常用的非渗透性冷冻保护剂有蔗糖等。
冻卵的方法
- 慢冻法（Slow - Freeze）
- 慢冻法在卵子仍处于代谢状态时使用较低的初始冷冻保护剂浓度，以降低毒性。冷冻保护剂通常在室温下添加，然后温度逐渐降低（约 2°C/min）到 -6°C 的播种温度。在这个温度下，通过用冰冷的器械触碰冻存容器的外部，引入一个小冰晶作为种子，诱导溶液中的冰晶形成。然后溶液在这个温度下保持一段时间（如 10 - 30 分钟）以达到平衡，之后温度再逐渐降低到 -32°C。在这个过程中，冰晶在细胞外介质中逐渐生长，冷冻保护剂浓度逐渐增加，特别是在细胞内空间，通过非渗透性冷冻保护剂进一步脱水。最后将冷冻容器投入液氮中。
- 在解冻时，为了防止冰晶再结晶，需要快速升温，但要注意避免渗透性冷冻保护剂在细胞内高浓度引起的渗透压冲击，因此需要使用额外的非渗透性冷冻保护剂。随着渗透性冷冻保护剂逐渐从卵子中扩散出来，非渗透性冷冻保护剂的浓度逐渐降低，直到卵子被放回标准培养基中。
- 快速冷冻法（Vitrification）
- 快速冷冻法（玻璃化冷冻）在室温下向细胞中添加高浓度的渗透性冷冻保护剂，由于这种高浓度的冷冻保护剂毒性较大，卵子不能在这个温度下长时间停留。经过短暂的平衡后，卵子直接投入液氮中。为了进一步防止冰晶形成，使用极快的冷却速度。在解冻时，也需要极快的升温速度以防止冰晶再结晶。
冻卵技术的临床应用
- 癌症患者的生育力保存
- 对于新诊断出癌症且面临绝育治疗的女性来说，冻卵是一种保存生育能力的方法。化疗和放疗等癌症治疗方法可能会导致卵巢功能衰竭，而冻卵可以在治疗前进行。例如，卵巢皮质含有大量原始卵泡，可以通过腹腔镜采集卵巢皮质，然后进行冻存。或者也可以采集处于生发泡阶段的卵子进行冻存，尽管生发泡卵子的体外成熟技术还不太可靠。
- 在癌症患者中使用冻卵技术也存在一些问题，如刺激卵泡和采集卵子所需的时间可能会延迟癌症治疗，而且对于患有全身性或播散性恶性肿瘤的患者，移植冻存的卵巢组织需要谨慎，因为可能存在残留的恶性细胞。
- 延迟生育
- 随着社会的发展，越来越多的女性选择延迟生育。由于年龄的增长会导致生育能力下降，冻卵为这些女性提供了一种在年轻时保存卵子的方法，以便在未来想要生育时使用。然而，目前对于冻卵技术在延迟生育方面的应用，还缺乏长期的数据，例如需要冻存多少卵子才能实现满意的怀孕率还不确定。
- 伦理问题及其他应用
- 冻卵技术为那些反对胚胎冷冻保存的夫妇提供了一种选择，也可以用于一些胚胎冷冻保存不合法的国家。此外，冻卵还可以用于卵子捐赠，通过冻存捐赠者的卵子，可以解决传统卵子捐赠中存在的一些问题，如捐赠者的可用性、成本、同步捐赠者和接受者的日程安排等。
冻卵技术的临床结果
- 存活率和受精率
- 不同的研究报道了不同的卵子存活率和受精率。例如，一些研究使用慢冻法报道的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率 60% - 70% 左右；而使用玻璃化冷冻法报道的卵子存活率和受精率可能更高，如一些研究中卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右。
- 怀孕率和活产率
- 从临床结果来看，冻卵后的怀孕率和活产率也在不断提高。慢冻法的活产率从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 2002 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2005 年之前的 29.4% 提高到 2005 年之后的 39%。同时，冻卵后的流产率也呈现出随着活产率提高而下降的趋势。
参考文献：Jain JK, Paulson RJ. Oocyte cryopreservation. Fertil Steril. 2006 Oct;86(4 Suppl):1037-46. doi: 10.1016/j.fertnstert.2006.07.1478. PMID: 17008147.
在人类辅助生殖领域，冷冻保存技术是一项非常重要的技术手段。它包括精子、胚胎和卵母细胞的冷冻保存。研究表明，精子和胚胎的冷冻保存已经成为常规操作，卵母细胞的冷冻保存也正逐渐在临床实践中得到更广泛的应用。
胚胎冷冻保存降低了新鲜胚胎移植的数量，提高了体外受精（IVF）周期的有效性。数据显示，同时进行新鲜胚胎和冷冻胚胎移植的女性，通过使用冷冻胚胎可获得额外 8% 的生育机会。卵母细胞冷冻保存相较于胚胎冷冻有更多优势，比如为因肿瘤治疗或慢性疾病面临生育力丧失风险的女性保存生育能力、用于卵子捐赠以及推迟生育等，还能避免胚胎冷冻所涉及的宗教和伦理道德问题。
冷冻保存技术的基本原理和方法
- 传统缓慢降温法
- 冷冻保护剂的作用
- 在胚胎和卵母细胞的冷冻保存过程中，防止冰晶形成和有毒溶质浓度过高是关键，这两者是导致细胞死亡的主要原因。为了实现这一点，细胞悬浮的冷冻溶液中需要添加冷冻保护剂（CPA）。CPA 分为细胞内 / 膜渗透性（如丙二醇、二甲基亚砜、甘油、乙二醇等）和细胞外 / 膜非渗透性化合物（如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、蛋白质、脂蛋白等）。渗透性 CPA 通过渗透梯度置换水分，部分占据细胞内水的位置，而非渗透性 CPA 则增加细胞外渗透压，在冷冻前支持细胞脱水，解冻后防止水分快速进入细胞。
- 不同阶段的处理
- 对于人类胚胎和卵母细胞，在缓慢降温前，通常会让其暴露于渗透性和非渗透性 CPA 的混合物中 10 分钟进行脱水。对于早期卵裂阶段的胚胎和卵母细胞，常用低浓度的丙二醇（1.5M）和蔗糖（0.1 - 0.25 - 0.5M），而囊胚阶段的胚胎则常用甘油。以最初成功的小鼠和牛胚胎冷冻保存协议为例，是将胚胎以 - 0.3°C - 0.5°C/min 的缓慢降温速率冷却到 - 80°C - 120°C，但这个过程很长（几个小时）。后来有了改进的方法，如将绵羊和牛胚胎以 0.3°C/min 的速率缓慢冷却到 - 30 - 35°C 后，再浸入液氮中，大大缩短了冷冻过程（1.0 - 1.5 小时）。人类胚胎一般是以 0.3°C/min 的低冷却速率冷却到约 - 30°C - 40°C，然后以 - 50°C/min 的速率增加冷却到 - 80°C - 150°C 后再浸入液氮中。在缓慢降温过程中，手动在 5 到 - 8°C 之间诱导冰晶成核（播种），缓慢冷却到 - 30°C - 40°C 后再快速冷却到 - 196°C 的胚胎 / 卵母细胞，需要在 25°C - 37°C 的温水中快速解冻，然后逐步去除 CPA 进行细胞再水化。
- 冷冻保护剂的作用
- 玻璃化（超快速冷冻保存）法
- 技术原理
- 玻璃化是一种不同于缓慢降温的冷冻保存方法，它是在低温下通过极端提高粘度使溶液固化，避免冰晶在细胞内和细胞外空间形成。这是通过高浓度的 CPA（4 - 8mol/L）和极高（超快速）的冷却速率实现的。在玻璃化过程中，细胞主要在超快速冷却开始前通过暴露于高浓度的 CPA 进行脱水，以获得玻璃化的细胞内和细胞外状态。但玻璃化过程中 CPA 的高浓度可能对细胞有毒性，不过可以通过混合不同的 CPA 来降低每种 CPA 的相对浓度，并将胚胎 / 卵母细胞暴露于溶液的时间减到最少来控制毒性。
- 操作要点
- 用于玻璃化的冷冻溶液由渗透性（如 EG、G、DMSO、PG、乙酰胺等）和非渗透性（如蔗糖、海藻糖等）试剂组成，有些协议还会补充大分子物质如聚乙二醇等。为了提高冷却速率，胚胎 / 卵母细胞玻璃化的溶液体积已被大幅减小（0.1 - 2μL），并开发了特殊的载体系统，如开放式拉伸吸管、Flexipet - 剥脱移液器、Cryotop 等。玻璃化技术操作难度较大，因为胚胎 / 卵母细胞必须在极短时间（<1min）内处理非常浓缩、粘稠且体积小的玻璃化溶液，所以操作人员需要经过良好的培训。
- 技术原理
人类胚胎和卵母细胞冷冻保存的实践经验及安全性
- 胚胎冷冻保存的实践经验
- 不同阶段的效果
- 对于人类胚胎冷冻保存，早期卵裂阶段胚胎解冻后至少保留一半初始卵裂球被认为是存活的。在一项大型多中心研究中，14000 个早期卵裂阶段缓慢冷冻和解冻的胚胎中，73% 的胚胎至少有一半初始卵裂球仍然完整，移植后的临床妊娠率和着床率分别为 16% 和 8.4%。对于囊胚冷冻保存，常用甘油和蔗糖的组合作为冷冻溶液，报道的内细胞团和滋养层细胞至少 50% 存活的存活率在 69% - 98% 之间，着床率在 16% - 30% 左右。早期卵裂阶段人类胚胎已成功在多种基于 DMSO、EG 等的溶液中玻璃化，存活率约 60% - 80%，且有多个妊娠 / 分娩案例。囊胚玻璃化常用 EG 和 DMSO 的混合物作为溶液，报道的总体存活率在 70% - 99% 之间，着床率在 20% - 50% 左右。
- 不同方法的比较
- 在一些比较研究中，发现玻璃化和缓慢降温在胚胎存活和着床率方面各有优劣。例如，在某些情况下玻璃化的卵裂阶段和囊胚阶段胚胎解冻后存活率较高，但在有经验的群体中，玻璃化并不比缓慢降温有更高的怀孕概率。
- 不同阶段的效果
- 卵母细胞冷冻保存的实践经验
- 不同方法的影响
- 在缓慢冷冻卵母细胞方面，提高蔗糖浓度（从 0.1M 到 0.3M）可以提高脱水率以及 MII 卵母细胞的存活率和受精率。改变 CPA 的平衡温度、冰晶成核和将胚胎浸入液氮的操作，以及用胆碱替代钠或直接向卵母细胞细胞质中注射蔗糖等方法都能提高卵母细胞的存活率。但缓慢冷却的卵母细胞相对于新鲜对照组发育较慢。在玻璃化卵母细胞方面，常用的玻璃化溶液由渗透性（2.7M EG 和 2.1M DMSO）和非渗透性 CPA（0.5M 蔗糖）组成，改进的玻璃化技术提高了玻璃化人类卵母细胞解冻后的存活率和受精率，与新鲜对照卵母细胞相当。
- 不同方法的影响
参考文献：Konc J, Kanyó K, Kriston R, Somoskői B, Cseh S. Cryopreservation of embryos and oocytes in human assisted reproduction. Biomed Res Int. 2014;2014:307268. doi: 10.1155/2014/307268. Epub 2014 Mar 23. PMID: 24779007; PMCID: PMC3980916.
展开更多
