过敏原检测哪种方法最准确？

变态反应性疾病是机体对或多种物质不耐受而发生的病理性免疫应答，在最近的20～30年内，由于环境问题，气候变化，世界范围内的发病率都有逐年增加的趋势，在英国每年过敏性哮喘的患儿增加5%。

 

疾病的范围涉及到皮肤科、耳鼻喉科、呼吸内科、消化科及儿科等，对人类健康造成了不同程度的危害，严重者甚至可导致生命危险。现已确认有300 多种抗原可引起过敏性疾病，变应原的识别，是变应性疾病诊断、特异性免疫治疗及预防进一步暴露于过敏原的关键。

 

现国内的过敏原检测方法及试剂繁多，使检测结果有较大差异,给临床的诊断和治疗带来了一定的混乱。然而本文重点对变应原检测的方法、结果的分析、存在的问题及对治疗的指导加以综述，为临床标准化工作提供参考。

 

变态反应性疾病为IgE介导的Ⅰ型速发变态反应，变应原检测可体内和体外两种方法。

 

一、   体内试验

 

体内试验可以显示由肥大细胞脱颗粒引起的皮肤及黏膜反应。国内常用的变应原点刺液及皮试液主要有：由北京协和医院变态反应科实验室提供的提纯液，由德国AllergoPharma公司及丹麦ALK公司提供的标准化试剂。

 

不同的产品原理相同，操作方法大致相同，结果判断相似，但因其含变应原的浓度不同，所得结果不尽相同。

 

 

1、皮肤试验(skin test)

 

问世于1909年，具有简单、快速、低花费和高敏感性的特点，主要分为皮内实验和点刺试验两种。

 

1.1 皮内试验皮内注射试验(intradermal test, IT)以德国AllergoPharma公司的标准化皮试液为例。方法: 将皮试液0.01～0.05ml注射到上臂外侧或后背皮内，10～20min后读试验结果。对照、变应原皮试液提供单位及结果判断点刺试验。

 

皮内试验是皮肤试验的经典方法，结果较可靠、测试剂量控制较严格。近年来由于此法较繁琐，有一定痛感，不适合于小儿患者，已逐渐被点刺试验所取代。如青霉素皮试就属于皮内试验。

 

1.2皮肤点刺试验(skin prick test, SPT) 点刺试验可视为一种特殊的皮内试验，是目前国际特别是欧美国家推崇的过敏原体内检测方法。

 

因其是皮肤的点刺液仅为皮内试验的万分之一，安全性及灵敏度高、准确度高，由于皮损小，患者无痛楚，就如被蚊叮一样等特点，已逐渐取代了传统的皮内试验。

 

被认为是检测吸入性过敏原引起的过敏反应的首选检测方法并成为过敏性疾病的主要的诊断工具

 

【原理】当有某种变应原进入皮肤时，对某些物质有速发型过敏反应的患者，立即特异性地引起皮肤内的肥大细胞脱颗粒，释放组胺等活性物质，导致局部毛细血管扩张(红斑)，毛细血管通透性增强(水肿、风团)，阳性者表示对该抗原过敏。

 

【方法及结果判定】以德国AllergoPharma公司的标准化点刺液为例。变应原点刺液滴到前臂掌侧皮肤，将点刺针垂直通过滴在皮肤的试液刺入皮肤， 10～20min后读试验结果，含0.4％苯酚生理盐水作阴性对照，含0.4％苯酚的0.1％组胺溶液作阳性对照。

 

结果判断如下:出现淡黄色皮丘，其周围有红斑，为阳性反应。皮丘大于组胺为++++，皮丘等于组胺为+++，皮丘小于组胺为++或+，与生理盐水相同为阴性。

 

【适应症】可用于变应性鼻炎、湿疹、过敏性哮喘等变应性疾病的诊断及特异性免疫治疗前.

 

【禁忌证】有青霉素皮试过敏性休克史者；明显损害全身状态的疾病；试验部位有皮肤病变的疾病；接受β阻滞剂或ACE抑制剂的患者；肾上腺素过敏的患者；妊娠；5岁以下。

 

相对禁忌证：服用抗组胺药在药物3半衰期内；有可能的话，尽量在少症状的时候进行诊断。

 

【并发症】局部皮疹、皮肤坏死；极罕见全身严重副反应，如过敏性休克、喉水肿等。

 

【优点】特异性高，假阳性率低，简单、准确、经济。皮肤点刺试验因其安全，易于操作,灵敏度高，临床相关性好，痛苦小、副作用小，适合于儿童及高度敏感的。

 

【缺点 】化验项目较少，主观成分占得比较大。

 

【注意事项】欧洲变态反应和临床免疫学协会（EAACI）推荐其为最在检测开始前，一定要详细询问病史，检测要在有经验及具备抢救能力和设备的医院进行。

 

 2. 特异性激发试验（specific provocation test）

 

 是模拟自然发病条件、以少量致敏原引起一次较轻的变态反应发作、用以确定变应原的试验。根据患者发病部位的不同，可以进行不同器官的激发试验。

 

 

【方法及结果判定】支气管激发试验：试验前先测第一秒用力呼气量（FEV-1）和肺活量；吸入对照液或抗原液，吸入后15～20min复查FEV-1。

 

结果判定 阳性结果的判定标准如下：

 

(1)明显自觉症状，如胸部紧迫感和喘息等；

 

(2)肺部闻及哮鸣音；

 

(3)FEV-1下降20％以上。鼻黏膜激发试验： 可经抗原吸入法（粉剂）或滴入法（液体）进行，接触抗原15～20min后出现黏膜水肿和苍白，病人出现鼻痒、流涕、喷嚏等症状可即判为阳性反应。

 

结膜激发试验：将适当浓度的变应原浸液滴入患者一侧眼结膜，另一侧滴入生理盐水作对照；15～20min观察结果。试验侧结膜充血、水肿、分泌增加、痒感，甚至出现眼睑红肿等现象者为阳性反应。

 

【适应症】激发试验检测的适应证为临床高度怀疑为变应性疾病，而皮肤试验及体外试验为阴性的患者；多种过敏原过敏，寻找责任过敏原；过敏性哮喘患者免疫治疗前了解其耐受性等。

 

【优点】对食物过敏的患者为诊断的金标准。激发试验较皮肤试验的特异性高，与患者的病史、症状和过敏原吸附试验的相关性较强。

 

【注意事项】此试验有引起严重的哮喘急性发作或过敏性休克等严重并发症的潜在危险，所用抗原浓度不宜过高，应该由小到大递增；试验前必须做好系列抢救准备。

 

3.特异性斑贴试验（atopic patch test, APT）

 

斑贴试验是诊断接触性皮炎最可靠和最简单的方法。斑贴试验的应用已有百年历史，对接触性皮炎及某些过敏性皮肤病诊断的可靠性得到了充分证明，促进了接触性皮炎与皮肤变态反应检测的发展。

 

【原理】将可疑致敏物质敷贴于患者皮肤上，通过皮肤或粘膜进入机体后由抗原呈递细胞将抗原呈递给T淋巴细胞，使特异性T淋巴细胞活化，诱发炎症反应。

 

【方法及结果判定】以瑞典化学诊断AB公司的欧洲标准变应原的试器及斑贴试验为例。将变应原适量分别置于斑试器小室内,液体变应原则先在斑试器内放一滤纸片,然后滴加变应原。

 

将加好变应原的斑试胶带贴敷于患者背部肩胛下方无皮损处皮肤,并标记,嘱患者3 天内禁止剧烈活动。48h 后去除斑试物并观察记录，72h再次进行观察，判定结果。判读标准以国际接触性皮炎研究组推荐的标准为依据。

 

【适应症】 1、 接触性皮炎、湿疹、职业性皮肤病等因接触某些物质引起的变态反应发生的皮肤病。

 

2、当病因不明或有数种物质接触，需要寻找病因时，可做斑贴试验。

 

【相对禁忌证】皮肤有广泛病变者。

 

【并发症】可以引起接触性皮炎。副反应轻微，有皮疹及瘙痒的报道。

 

【优点】使用方便,结果准确。斑贴试验的灵敏度为97.8%,特异度为76.9%,准确性为90.3%,阳性预测值为88.2%,阴性预测值为95.2%。

 

【缺点】检查耗时长，容易脱落，检查项目少，无法检查食物及吸入性过敏原。

 

【注意事项】尽量少活动，不出汗以防斑贴移位或脱落。

 

4.化妆品过敏检测

 

通过封闭式斑贴法、光斑贴法、水疱疱液检测法、划破实验法等准确检测出过敏原与过敏的化妆品，并指导患者选择适合的化妆品。我国采用欧洲标准化斑贴试剂，检测精确。

光斑贴试验photo-patchtest通过在皮肤表面直接敷贴，并同时接受一定剂量适当波长紫外线照射的主法，检测光毒性与光变应性皮炎的光敏剂以及机体对某些光敏剂的光毒性或光变应性反应的一种皮肤试验。

 

患光线过敏性皮肤病时为了证实有无光感物质存在应作光线斑贴试验。特别对外因性光敏物质有用；方法和一般的斑贴试验一样，首先将被检物贴敷在患者背部或前臂屈侧，同时照射UVB(280-320nm)和(320-400nm)，测定其最小红斑量(MED)。

 

24-48小时后以3/4MED的光线照射贴敷物的一半，再过48小时观察结果，如果仅在贴敷物+照射部位发红，浮肿或发生小丘疹(有时发生小水疱)时为物质。

 

 二、 体外试验

 

体外试验为免疫化学测定，一般是检测血清中的sIgE。

 

适应证为：

 

(1)皮肤病变广泛，无法行皮试；

 

(2)有抗原诱发严重过敏反应史，体内试验有一定危险者；

 

(3)服用抗组胺药后皮肤反应受抑制，皮试结果不准确；

 

(4)该抗原不能作皮试，如化工原料等；

 

(5)皮肤试验结果与临床病史不符，需要进一步分析验证；

 

(6)特异性免疫治疗前，明确责任过敏原。体外试验安全无副反应及禁忌证。国内已出现多种检测系统，以下就不同的原理分述之。

 

1  放射性变应原吸附试验（radio allergo sorbent test, RAST）

 

【检测原理及结果】以瑞典Pharmacia 公司生产的Uni- CAP 系统最有代表性，它的基本原理是将变应原吸附在一种称作immuno CAP 的新型固体上，后者是装在小胶囊中的亲水性载体聚合物，由活化的纤维素衍生物合成，与变应原有极高的结合能力。

 

每个固相载体CAP均包被了不同的变应原，如患者血清中有针对该变应原的IgE，即可与变应原特异性结合，再加入酶标记的兔抗人抗IgE 血清（酶标二抗），即可形成固相载体—变应原—IgE—酶标二抗的复合物，经过洗涤及加入基质，最后加入发展液，发出荧光，根据荧光吸光度换算IgE含量，待测血清的荧光吸光度大于参考品为阳性，小于参考品为阴性，主要操作程序由仪器自动完成，并由仪器自动打印出结果。

 

 

【适应症】适用于皮试呈现假阳性的划痕症患者、严重过敏状态发作者、严重皮炎不能作皮试者以及皮肤反应差的老年人及3岁以下儿童，没有用昆虫、动物皮屑等变应原作皮试时产生的全身不适感，对过敏严重度评估，拟行特异性免疫治疗者用药前评估。

 

【禁忌症】安全无副反应及禁忌证

 

【优点】灵敏度高、特异性高，一种过敏原一个反应帽，临床选择余地大，可多可少，任意组合。最多可以查600种过敏原。抽血量少，痛苦小。不受对症治疗用药的影响，也不受过敏症状的干扰。全自动出结果，客观性强。被誉为过敏原体外检测的“金标准”。

 

【缺点】价格高。

 

2  酶联免疫法（ELISA）

 

 【检测原理及结果】  以美国ASI公司过敏原体外检测试剂盒为例，它的基本原理是：当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后，血清中特异性IgE就会特异地结合到抗原上，此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别，加入显色剂后，二抗所联的酶使显色剂由橘黄色变为蓝色。

 

显色的深度与血清中特异性IgE成正比；能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。结果判定：根据显色的不同，可鉴定为5个等级（0～4级）。

 

 3、免疫印迹法

 

【检测原理及结果】以德国MEDIWISS公司生产的AlleryScreen过敏原检测系统为例。特异性过敏原被吸附于硝酸纤维素膜表面，加入患者血清后孵育，标本中的特异性IgE与过敏原发生反应，结合到硝酸纤维素膜上。

 

加入碱性磷酸酶标记的链酶亲和素，与生物素结合。加入BCIP/NBT酶作用底物孵育后，发生特定底酶显色反应，试剂条上出现沉淀。颜色的深浅与血清中sIgE抗体含量成正比，待试剂条干燥后，由专用过敏原监测仪检测，读取定量检测结果。

 

【系统特点】  其他方法是将过敏原共价修饰结合于固相物，而此系统中浓缩的过敏原是未经任何修饰地连接到硝酸纤维素膜上，并且使用了生物素－亲和素放大系统，使得及微量的IgE亦可被检测。

 

AlleryScreen系统有极好的敏感度，与CAP系统相似，但与皮试相比略低。在一个标本内检测可到20种抗原，仅需250μl血清，可以作为临床过筛试验。

 

【优点】操作简单、方便、成本低。可靠性高，特异性好，敏感度高。

 

4、食物不耐受的检测

 

食物不耐受指的是一种复杂的变态反应性疾病。

 

人的免疫系统把进入人体内的某种或多种食物当成有害物质，从而针对这些物质产生过度的保护性免疫反应，产生食物特异性IgG抗体，IgG抗体与食物颗粒形成免疫复合物（Ⅲ型变态反应），可引起所有组织（包括血管）发生炎症反应，并表现为全身各系统的症状与疾病。

 

通常做的食物不耐受14项检测包括：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、螃蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿和小麦。此组合是根据大量临床流行病学统计数据得出的结果。

 

检测只需抽取1毫升血液。抽血前可正常饮食，无需特殊要求。

 

采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行测试。该测试结果能显示受检者是否对某种食物不耐受以及不耐受程度（轻度、中度或是重度）。医生可据此给出正确的饮食建议。

 

IgG抗体通常介导延迟性过敏反应，目前我国还只能运用其检测慢性的食物过敏，我们临床称为食物不耐受检测，通过这种检测能将我们自己无法观察到的，慢慢损伤我们身体的食物筛查出来，从而避免许多慢性疾病（哮喘、鼻炎、失眠、头痛、慢性腹泻、口腔溃疡、荨麻疹、痤疮、易疲劳、忧郁、气喘、睡眠障碍、磨牙等等），这种检测是目前我国过敏原检测方法中最有意义的。

 

但不足的是仅开展了对食物的检测，尚不能通过这种方法检测吸入和接触过敏原。

 

食物不耐受检查也是唯一针对食物过敏的迟发反应(IgG)检测手段。

 

5、生物共振  

 

根据物质波理论，所有物质都具有特异性的基础振动频率，当两种相同的振动频率相遇时可发生波的叠加而增幅，这种共振效应同样存在于声波、电磁波等一切波动的物质。

 

利用这一原理可以鉴别一种波与另一种波是否相同，若相同则发生共振，不相同则不发生共振，BICOM利用共振效应，检测不同物质是否可以在体内引起有特异性的频率变化来确定过敏物质即过敏原。

 

百康生物物理过敏原检测：利用细探针对人体手指信息点进行检测，观察电磁信号的变化确定过敏原。

 

百康生物物理过敏原检测主要有以下优势：

 

①无痛、无创、无需抽血、无副作用；

 

②随机配备近500种、5大类过敏原，还可以自带实物检测怀疑过敏的物质，过敏原种类无限量；

 

③检测时间短，15~20分钟可立即得出检测结果；

 

④可进行药物检测，检测该药物是否有效；

 

⑤检测准确，临床符合率高；

 

⑥适应人群广泛：所有过敏及过敏疾病潜在人群，儿童至老年均可；

 

⑦并且可以迅速进行脱敏治疗，治愈过敏性疾病。

 

三、 白细胞反应性实验

 

通过仪器观察人体白细胞对过敏原的反应变化，了解人体是否对其过敏。这种方法是现今世界最为准确的过敏原检测法，能检测的过敏原范围也广，甚至能检测出香精香料等添加物的过敏性。可惜我国还没有开展这种先进的检验。

 

变应原临床检测的选择及诊断

 

变态反应性疾病的变应原诊断是一个综合过程，包括明确的临床病史（过敏原吸入过敏史、接触过敏史及食物过敏史），皮肤试验，特异性激发试验及血清特异性IgE的检测等。

 

 皮肤点刺试验因其简单、经济、安全，为首选检查。

 

皮肤试验与病史相符时，可以明确诊断。分析皮肤试验结果必须结合病史，皮肤试验阳性，与病史相符，则提示其为疾病的致敏原；相反，病史阴性，皮试也阴性，基本可认为该变应原与本病无关。

 

皮肤试验诊断多种过敏原过敏，应作血清IgE及激发试验明确责任过敏原。皮肤试验与病史不相符时，应进一步做血清IgE及激发试验以综合分析。

 

血清特异性IgE检测，可作为皮肤试验有禁忌证、皮肤试验与病史不符、皮肤试验诊断为多种过敏原过敏的患者。有多种过敏原过敏的患者，皮肤试验及血清特异性IgE分级都高的变应原可考虑为责任变应原。

 

规范的激发试验是最可靠的特异性诊断方法，尤其对于食物过敏的患者，因食物过敏原的皮肤试验和特异性IgE检测结果准确性差，随机双盲的食物激发试验是诊断食物过敏的金标准。

 

激发试验因其有诱发严重过敏反应的可能，不能作为临床常规的检查方法。当皮肤试验及血清特异性IgE均为阴性，临床有明确过敏原接触过敏史，有确诊必要性时；

 

当已确诊多种过敏原过敏，不能确定责任过敏原时；过敏性哮喘患者在特异性免疫治疗前，为评估治疗耐受性时，可做激发试验。激发试验只有在非常必要时进行，患者知情同意，有抢救措施及能力，出现副反应及时救治。

 

在疾病发作期不宜进行激发试验。

 

总之，过敏原的诊断需要有经验的医生根据病史和检查做出全面、正确的评估。