做了脊柱矫形手术，做完之后4天下肢没有知觉，术前有知觉，确实有些脊柱矫形手术还是存在风险的。如果手术后出现神经损伤，有一部分患者还是可以恢复的，但是很难讲。建议肯定要跟主管医生抓紧沟通，看看有什么原因，比如有骨头卡住神经，或者有螺钉压住神经，让医生仔细评估一下。如果有这些情况，抓紧解决，恢复的机会大一些。

脊柱肿瘤，如果是转移瘤，对脊柱稳定性有破坏，另外一个，脊柱肿瘤如果影响到了脊髓神经的压迫，这种转移瘤是要做手术的。做手术以后，得到局部的控制，然后再进行对应的肿瘤科的治疗，一般来说，很多患者可以获得很好的效果。部分转移瘤的病人，因为他的肿瘤对新辅助化疗，靶向治疗、基因治疗的效果非常好，有些肿瘤患者的生存期也显著增长，很多病人做完手术以后有5-10年的生存期。所以不是得了脊柱肿瘤，就一定是离死亡不远，不是这样的。另外，脊柱肿瘤里面还有一些恶性的和良性的肿瘤，对于脊柱的恶性肿瘤，如果是没有发生转移，主要是在脊柱上发生的，一般做脊椎的全椎切除，切掉以后，再给他做脊柱的重建，病人效果也非常好。 还有脊柱的良性肿瘤，一般做局部的切除就可以了，不用做非常大的手术。

你可能见过脊医(俗称脊医、护骨师)在矫正病人脊椎关节时发出“啪嗒”声。虽然听起来很恐怖，但只要经过专业评估诊断，是一种相对低风险的治疗方法。这种正骨，俗称正骨，是通过快速、精确的动作来调整错位的肌肉骨骼，以保证受伤的细胞和组织能够自愈，提高肌肉和软组织的活性。脊骨疗法的好处和应该注意的安全规则列在下面供你参考。

 

脊椎指压疗法有助于缓解疼痛和压力。

捏脊疗法，也叫捏脊疗法，最大的优点是可以恢复关节活动，尤其是脊柱，不需要吃药，也不存在手术风险。此外，脊椎指压疗法还常用于缓解创伤性组织损伤、长期坐姿不正确、颈背痛、偏头痛等引起的肌肉、骨骼、结缔组织疼痛，减轻免疫系统压力。大多数人在脊椎指压治疗后会突然感到“放松”。这是因为去除了错误关节放置造成的脊柱压力，使脊柱上的神经细胞恢复了原来的效率，人充满了活力。

 

比如胸椎和中颈椎错位，可能会导致肺部异常，比如哮喘。如果连接胃部的脊柱错位，可能会影响胃酸的分泌，引起胃部不适。另一方面，如果脊柱关节处于正确的位置，身体系统的运作就会有效。

 

对于孕妇来说，脊椎按摩也可能有助于顺利分娩，因为女性的身体在怀孕期间会发生一些变化，如体重增加和骨盆韧带松弛。温馨提醒，捏脊前请向医生报告自己的病史和日常生活，以保证身体不受伤害。

 

此外，有些人不适合脊椎指压治疗，包括患有关节炎、骨质疏松症和正在接受血液稀释药物治疗的患者。对于癌症患者，首先需要征得主治医生的同意。避免脊椎指压疗法的其他条件包括手脚刺痛或无力、高风险中风症状和上颈部骨骼异常。

 

捏脊相对安全，有些脊医出于安全考虑会避免调整颈部，所以捏脊后的不适顶多是轻微酸痛僵硬；尽管如此，还是建议大家先做好功课，包括预约体检，了解身体状况，这样才能规避风险，获得最完美的整脊效果。最后，捏脊疗法不一定适合所有人。如果治疗几周后仍然无效，也许可以考虑其他治疗方法，进一步诊断检查。

 

 

很多人习惯找传统康复技术，觉得酸痛紧绷。虽然轻微的症状可能相当情绪化，但是涉及到整脊技术，有一定风险。当大家在肌肉骨骼方面有任何问题或疼痛时，建议去卫生部或骨科进行评估、诊断和治疗。如果还有需要，可以带诊断书到自费理疗中心治疗。

现在市面上宣传各类健康，但脊柱的问题往往会忽视。

 

高低肩、大小胸、两侧后背不一样高、长短腿、腰背疼痛等现象却屡见不鲜，但很少有人知道，这些问题都投射了「脊柱问题」。

 

 

首先我来说一些常见的问题和对应的症状。

 

颈椎压迫或肌肉劳损

 

 

1、脖子、肩膀、手臂感觉酸、麻、疼、痛。

 

2、肩膀窝（肩）酸痛。

 

3、颈部疼痛造成入睡困难。

 

4、以前失败的颈部手术，尤其是有复发或更严重的症状出现。

 

5、臂膀/手的复原缓慢。

 

腰椎压迫或肌肉劳损

 

1、腰部、臂部、腿部感觉酸、麻、疼痛。

 

2、背痛造成无法弯下、弯腰、或提举物品困难。

 

3、以前失败的背部手术，尤其是有复发或更严重的症状出现。

 

4、背部疼痛造成入睡困难。

 

脊柱弯曲

 

1、观察两侧肩膀不一样高或者骨盆存在倾斜。

 

2、脚与肩同宽，双手合十身体向前弯，身边人在正后方观察两边背部不一样高。

 

 

3、在正后侧触摸脊柱有弯曲的现象。

 

4、坐久或者站久，存在腰背部酸胀、疼痛。

 

类风湿、强直性脊柱炎

 

1、臂膀/手或腿部的复原缓慢。

 

2、间歇性全身关节疼痛，僵硬或肿胀。

 

3、脊柱强直或者脊柱畸形。

 

脊柱“牵一发、动全身”

 

以一个长期伏案工作的右撇子同学为例子，平时也一直没有锻炼的机会，全身肌肉处于一种松弛的状态，因为右手用的更多，右侧的斜方肌利用率比较高，它长期处于“工作”状态，慢慢的就变得紧张，开始出现劳损, 对胸椎的牵拉力量就会减弱。

 

左右两侧肌肉的平衡被打破了，胸椎容易向左产生侧弯。那么：

 

如何恢复脊柱两侧的平衡，缓解病痛呢？

 

哪些锻炼更适合脊柱疾病的病人？

 

如何维持一个良好的体态？

 

办公室一族如何保护脊柱？

 

针对这些问题，可以点击下方问诊卡向医生进行咨询。

 

作者 | 北京大学第一医院 关节科 张道俭医生

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“腰痛”“直不起腰”的重要原因-脊柱相关关节退变

腰痛在日常生活中的常见程度仅次于“感冒”。因为起病急且持续时间长，影响患者的正常生活和工作，常常引起焦虑。

腰痛常常被解释为腰肌劳损，而事实上 25 岁以上的 MRI 多少都能看到腰肌劳损等退变性表现，在 50 岁左右腰痛高发年纪就更常见了，““腰肌劳损”、椎间盘退变”、“终板退变变形”、“Modic 改变”、“关节突关节退变”、“棘上韧带钙化”，如此多的解剖结构退变，到底哪个才是真正引起腰痛的罪魁祸首？

临床上，50 岁周围的患者因为膝关节疼痛或者肩关节疼痛来就医的非常多，那么我们可以推测关节退变引起疼痛的可能性非常，因为关节因为其功能需要和保护机制，周围的感觉神经分布非常丰富，所以复杂的腰痛，更常见的原因是脊柱相关关节退变引起的疼痛。

腰椎的相关关节包括前方的椎间盘及上下结构、后方的关节突关节和骶骨于髂骨连接的骶髂关节。所以复杂的腰痛要寻找这三方面的原因。

疼痛严重影响生活质量，可以考虑性关节处阻滞治疗。

微创外科手术一直是广大患者和术者追求的，很多人从开始的排斥，观望直到慢慢接受了微创的理念，开始主动去学习其操作技巧和手法，并不断精进自己的操作技巧并拓宽手术的治疗范围。

从整体上讲，这是一个历史的潮流，基本外科从一开始的开腹探查切除病患，到后来腹腔镜胆囊摘除，腹腔镜胃大部切除，一直到现在结直肠、胰腺癌基本能够想到的手术全部都可以在腔镜下完成，而且现在机器人辅助系统如达芬奇手术机器人的出现，更是将腔镜下手术的理念推到一个新的高度，同样的演进发生在泌尿外科，胸外科。

骨科手术治疗的微创化也在不断进展，关节镜是其中的代表和主流，如膝关节镜、髋关节镜等等，肩负着诊和疗两大任务，通过可视化图形图像系统可以直观的看到关节内的相关病变情况，必要的情况下可以同时通过操作通道进行组织活检，半月板修复，病损切除，甚至做到交叉韧带重建等，但在骨科高发病脊柱领域微创的发展还刚刚起步，拿大家最常见的疾病椎间盘突出来讲，是由于突出的间盘导致神经根受压出现坐骨神经痛，但人类进化这么多年，他将最为脆弱的脊髓神经包覆在人体最核心的骨性椎管之中，外面还有层层的肌肉韧带筋膜等，为了摘除这一黄豆大小椎间盘，传统的开放手术需要经过所有的这些组织才能到达病灶目的地，在行经路上的损伤造成了术后的各种不适，同时对于脊柱稳定性的破坏也不得不以内固定的方式来进行补偿，由此带来术后腰背痛，局部融合术后腰部僵硬，运动节段丧失，内固定失败等等。随着技术的发展，内窥镜及手术器械的不断改进，目前这一系列的问题都可以通过靶点穿刺微创的方式解决，术中所有的病灶均可在成像系统放大后在肉眼可及的范围之内，直视下操作，安全性更高，术中组织损伤更小，出血不超过15ml，术后即刻即可以下地活动，由于没有对脊柱的稳定性结构造成更大的破坏，也不需要内固定融合，保留了患者腰椎的活动单元，相应也减轻了经济负担。

 随着脊柱微创的发展和成熟，除单纯的椎间盘摘除外，像椎管狭窄，硬膜外占位、内固定术后邻近节段退变等等疾病也可以微创处理。

  微创是一个理念，是一个工具，它有自己的应用范围和历史舞台，是脊柱手术治疗的一个有益和有力的补充，我相信脊柱微创终将像基本外科、泌尿外科、胸外科一样，迎来自己的高光时刻。

 

冻卵，受到了越来越多的关注。但你对冻卵女性了解有多少？她们年龄多大？冻卵后她们又如何使用的？通过1篇荟萃分析我们来一起揭秘。

一、研究方法

研究人员按照系统综述和荟萃分析的首选报告项目（PRISMA）建议进行了系统综述。他们搜索了 PubMed、Scopus 和 Web of Science 从建库到 2021 年 1 月的文献，对发表日期没有限制。纳入的研究需为英文，且研究了计划性冻卵的使用者或潜在使用者的特征、最初信息来源以及卵子处置情况。提取的数据通过主题分析进行分析，纳入研究的方法学质量使用 QualSyst 标准进行评估。

二、研究结果

1. 研究筛选情况
   • 最初检索到 1074 条记录，其中 29 项研究符合纳入标准，包括 12 项定性研究和 17 项定量研究。调查的回复率在 38% - 85% 之间。
2. 女性特征
   • 计划性冻卵的使用者或潜在使用者大多为单身、受过高等教育、有工作，平均年龄为 37 岁。
3. 信息来源
   • 媒体和朋友是计划性冻卵最初知识的最常见来源，而健康专业人员则是较不常见的来源。
4. 卵子使用情况
   • 大多数计划性冻卵者没有尝试使用冷冻卵子怀孕，但她们并不后悔进行了该过程。

三、讨论与启示

1. 人口特征与卵子使用
   • 计划性冻卵的大多数使用者或潜在使用者具有特定的人口统计学特征，并且最终大多没有使用她们冷冻保存的卵子。这可能是由于多种原因，比如在冻卵后的生活中，她们的生育计划发生了改变，或者虽然有生育的想法但尚未尝试使用冷冻卵子。
2. 卵子处置的选择
   • 对于未使用的卵子，存在多种处置方式。可以选择丢弃，这可能是因为女性认为自己不再需要这些卵子，或者缺乏合适的使用途径。也可以选择捐赠给其他女性，为那些有生育困难的女性提供帮助。此外，还可以捐赠给研究机构，用于相关的科学研究，以推动生育医学的发展。
3. 对健康专业人员的指导意义
   • 了解计划性冻卵潜在使用者的主要特征，健康专业人员可以更加主动地宣传正确的冻卵知识，包括冻卵的风险、成功率以及后续可能面临的问题等。同时，在咨询过程中，也可以根据女性的年龄、婚姻状况和生育计划等因素，提供更加个性化的建议，帮助她们做出更有效的决策。

参考来源：Giannopapa M, Sakellaridi A, Pana A, Velonaki VS. Women Electing Oocyte Cryopreservation: Characteristics, Information Sources, and Oocyte Disposition: A Systematic Review. J Midwifery Womens Health. 2022 Mar;67(2):178-201. doi: 10.1111/jmwh.13332. Epub 2022 Feb 13. PMID: 35156301.

原始卵泡位于卵巢皮质中，处于静止状态。其数量在出生时就已确定（每个卵巢大约 60 万到 100 万个），并在儿童期和整个生育期持续逐渐减少，因为原始卵泡会被募集并离开静止状态。

大多数原始卵泡在初次募集后发生闭锁，无法达到窦状卵泡阶段，只有少数能继续生长直至排卵，在生育期大约排卵 450 次左右，只有极少数卵泡能发育成有受精能力的卵子。当原始卵泡几乎耗尽，只剩下大约 1000 个原始卵泡时，就会导致绝经。

随着女性生育观念的转变以及医学技术的飞速发展，冻卵技术作为一种生育力保存的手段，正逐渐走进大众的视野。这一技术为女性在面临生育挑战时提供了一种可能的解决方案，无论是因为职业发展、个人生活规划，还是由于疾病治疗等原因导致的生育延迟或生育风险增加。

一、冻卵技术的原理与方法

冻卵技术的核心原理是在极低的温度下保存卵子，使其代谢活动几乎停止，从而延长卵子的存活时间。目前主要有两种常见的冻卵方法：慢冻法和玻璃化冷冻法。

慢冻法是一种较为传统的方法，它通过逐步降低温度，让卵子在这个过程中逐渐适应低温环境。在这个过程中，会使用一些冷冻保护剂来减少冰晶的形成，因为冰晶可能会对卵子的结构造成损伤。具体来说，卵子首先在含有一定浓度冷冻保护剂的溶液中进行预处理，然后以相对缓慢的速度降温，经过多个阶段的温度调控，最终将卵子储存于液氮中，温度可达 -196°C。

玻璃化冷冻法则是一种更为先进的技术，它能够在更短的时间内实现卵子的冷冻。这种方法使用了更高浓度的冷冻保护剂，并且通过极快的冷却速度，使卵子在瞬间从液态转变为一种类似玻璃的固态，从而避免了冰晶的形成。玻璃化冷冻法在保护卵子的结构和功能方面具有一定的优势，因此近年来受到了越来越多的关注和应用。

二、冻卵技术的适用人群与临床应用

1. 癌症患者的生育力保存 对于许多癌症患者，尤其是年轻女性，化疗、放疗等治疗手段可能会对卵巢功能造成不可逆的损害，导致生育能力丧失。冻卵技术为这些患者提供了在接受治疗前保存生育能力的机会。例如，在一些血液系统癌症或生殖系统癌症的治疗中，医生会建议患者在开始治疗前考虑冻卵。通过采集卵子并进行冷冻保存，患者在治愈癌症后，如果有生育的意愿，就有可能使用这些冷冻的卵子尝试受孕。
2. 延迟生育的女性 随着社会的发展，越来越多的女性选择在事业有成之后再考虑生育问题。然而，女性的生育能力会随着年龄的增长而逐渐下降，尤其是在 35 岁之后，这种下降趋势更为明显。冻卵技术为这些希望延迟生育的女性提供了一种保障。她们可以在年轻、生育能力较强的时候将卵子冷冻保存，等到合适的时机再尝试受孕。

三、冻卵技术的临床效果与影响因素

1. 卵子的存活率和受精率 冻卵技术的临床效果受到多种因素的影响。从卵子的存活率和受精率来看，不同的研究报道结果有所差异。一般来说，玻璃化冷冻法在卵子存活率和受精率方面可能表现出一定的优势。一些研究显示，玻璃化冷冻法的卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右；而慢冻法的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率在 60% - 70% 左右。然而，这些数据并不是绝对的，实际的存活率和受精率还会受到卵子本身的质量、冷冻保护剂的使用、冷冻和解冻的操作过程等多种因素的影响。
2. 怀孕率和活产率 冻卵后的怀孕率和活产率也是衡量技术效果的重要指标。随着技术的不断发展，冻卵后的怀孕率和活产率也在逐步提高。例如，慢冻法的活产率从早期的较低水平逐渐上升，从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 20，02 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2004 年之前的 29.4% 提高到 2004 年之后的 39%。但需要注意的是，怀孕率和活产率还与女性的年龄、身体状况、受孕环境等多种因素密切相关。

冻卵技术作为一种新兴的生育力保存手段，为女性的生育选择提供了更多的可能性。然而，我们也应该清醒地认识到，这项技术仍然处于不断发展和完善的过程中，面临着诸多技术挑战和伦理法律问题。只有通过不断的研究和探索，才能使冻卵技术更好地服务于女性的生育健康，为更多女性实现生育梦想提供有力的支持。

参考文献：Cacciottola L, Donnez J, Dolmans MM. Ovarian tissue and oocyte cryopreservation prior to iatrogenic premature ovarian insufficiency. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2022 May;81:119-133. doi: 10.1016/j.bpobgyn.2021.09.010. Epub 2021 Nov 15. PMID: 34887172.

在当今社会，女性面临着多种可能影响生育能力的因素，如癌症治疗、延迟生育等。因此，生育力保存成为了一个重要的研究领域，而冻卵技术作为其中的一种方法，正逐渐受到关注。其目的在于为面临生育风险的女性提供一种保存生育能力的选择，以便在未来需要时能够实现生育梦想。

冻卵技术的原理

为了长期保存细胞的活性，需要将细胞置于极低的温度下，使其进入一种类似于 “暂停生命活动” 的状态。对于哺乳动物细胞来说，通常使用的储存温度是 -196°C（液氮的温度）。在这个温度下，水呈固态，生物反应停止，对冻存细胞的主要威胁被认为是背景辐射对 DNA 造成的损伤。

然而，冻卵过程中最关键的是要避免在温度变化过程中对卵子造成损伤。当水冷却到冰点以下时会形成冰晶，冰晶的体积比液态水大，会对细胞内的细胞器造成压力和剪切力，导致细胞受损。因此，避免冰晶形成是成功冻卵的首要目标。此外，随着水的冻结，溶质被排除在固体之外，会使剩余未冻结溶液的溶质浓度升高，对细胞内蛋白质产生毒性，避免这种溶液效应是第二个目标。在解冻过程中，如果升温缓慢，会有自由水解冻和再结晶的危险，而快速升温则可能导致细胞外渗透压突然下降，引起自由水快速流入细胞，造成细胞肿胀和损伤，即渗透压冲击，避免这种情况是第三个目标。

为了实现这些目标，所有成功的冻卵方法都使用了一种叫做冷冻保护剂的化学物质。冷冻保护剂分为渗透性和非渗透性两类。渗透性冷冻保护剂是小分子物质，能够穿透细胞膜，与水分子形成氢键，防止冰晶形成，并在一定浓度下可使水形成玻璃化状态（一种固态但不膨胀的状态）。常用的渗透性冷冻保护剂有丙二醇（PROH）等。非渗透性冷冻保护剂则留在细胞外，通过从细胞内吸取自由水来使细胞内空间脱水，从而增加渗透性冷冻保护剂在细胞内的浓度，进一步协助防止冰晶形成。在解冻过程中，非渗透性冷冻保护剂还可以防止因细胞内冷冻保护剂不能快速扩散出去而导致的渗透压冲击，常用的非渗透性冷冻保护剂有蔗糖等。

冻卵的方法

1. 慢冻法（Slow - Freeze）
   • 慢冻法在卵子仍处于代谢状态时使用较低的初始冷冻保护剂浓度，以降低毒性。冷冻保护剂通常在室温下添加，然后温度逐渐降低（约 2°C/min）到 -6°C 的播种温度。在这个温度下，通过用冰冷的器械触碰冻存容器的外部，引入一个小冰晶作为种子，诱导溶液中的冰晶形成。然后溶液在这个温度下保持一段时间（如 10 - 30 分钟）以达到平衡，之后温度再逐渐降低到 -32°C。在这个过程中，冰晶在细胞外介质中逐渐生长，冷冻保护剂浓度逐渐增加，特别是在细胞内空间，通过非渗透性冷冻保护剂进一步脱水。最后将冷冻容器投入液氮中。
   • 在解冻时，为了防止冰晶再结晶，需要快速升温，但要注意避免渗透性冷冻保护剂在细胞内高浓度引起的渗透压冲击，因此需要使用额外的非渗透性冷冻保护剂。随着渗透性冷冻保护剂逐渐从卵子中扩散出来，非渗透性冷冻保护剂的浓度逐渐降低，直到卵子被放回标准培养基中。
2. 快速冷冻法（Vitrification）
   • 快速冷冻法（玻璃化冷冻）在室温下向细胞中添加高浓度的渗透性冷冻保护剂，由于这种高浓度的冷冻保护剂毒性较大，卵子不能在这个温度下长时间停留。经过短暂的平衡后，卵子直接投入液氮中。为了进一步防止冰晶形成，使用极快的冷却速度。在解冻时，也需要极快的升温速度以防止冰晶再结晶。

冻卵技术的临床应用

1. 癌症患者的生育力保存
   • 对于新诊断出癌症且面临绝育治疗的女性来说，冻卵是一种保存生育能力的方法。化疗和放疗等癌症治疗方法可能会导致卵巢功能衰竭，而冻卵可以在治疗前进行。例如，卵巢皮质含有大量原始卵泡，可以通过腹腔镜采集卵巢皮质，然后进行冻存。或者也可以采集处于生发泡阶段的卵子进行冻存，尽管生发泡卵子的体外成熟技术还不太可靠。
   • 在癌症患者中使用冻卵技术也存在一些问题，如刺激卵泡和采集卵子所需的时间可能会延迟癌症治疗，而且对于患有全身性或播散性恶性肿瘤的患者，移植冻存的卵巢组织需要谨慎，因为可能存在残留的恶性细胞。
2. 延迟生育
   • 随着社会的发展，越来越多的女性选择延迟生育。由于年龄的增长会导致生育能力下降，冻卵为这些女性提供了一种在年轻时保存卵子的方法，以便在未来想要生育时使用。然而，目前对于冻卵技术在延迟生育方面的应用，还缺乏长期的数据，例如需要冻存多少卵子才能实现满意的怀孕率还不确定。
3. 伦理问题及其他应用
   • 冻卵技术为那些反对胚胎冷冻保存的夫妇提供了一种选择，也可以用于一些胚胎冷冻保存不合法的国家。此外，冻卵还可以用于卵子捐赠，通过冻存捐赠者的卵子，可以解决传统卵子捐赠中存在的一些问题，如捐赠者的可用性、成本、同步捐赠者和接受者的日程安排等。

冻卵技术的临床结果

1. 存活率和受精率
   • 不同的研究报道了不同的卵子存活率和受精率。例如，一些研究使用慢冻法报道的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率 60% - 70% 左右；而使用玻璃化冷冻法报道的卵子存活率和受精率可能更高，如一些研究中卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右。
2. 怀孕率和活产率
   • 从临床结果来看，冻卵后的怀孕率和活产率也在不断提高。慢冻法的活产率从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 2002 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2005 年之前的 29.4% 提高到 2005 年之后的 39%。同时，冻卵后的流产率也呈现出随着活产率提高而下降的趋势。

参考文献：Jain JK, Paulson RJ. Oocyte cryopreservation. Fertil Steril. 2006 Oct;86(4 Suppl):1037-46. doi: 10.1016/j.fertnstert.2006.07.1478. PMID: 17008147.

在人类辅助生殖领域，冷冻保存技术是一项非常重要的技术手段。它包括精子、胚胎和卵母细胞的冷冻保存。研究表明，精子和胚胎的冷冻保存已经成为常规操作，卵母细胞的冷冻保存也正逐渐在临床实践中得到更广泛的应用。

胚胎冷冻保存降低了新鲜胚胎移植的数量，提高了体外受精（IVF）周期的有效性。数据显示，同时进行新鲜胚胎和冷冻胚胎移植的女性，通过使用冷冻胚胎可获得额外 8% 的生育机会。卵母细胞冷冻保存相较于胚胎冷冻有更多优势，比如为因肿瘤治疗或慢性疾病面临生育力丧失风险的女性保存生育能力、用于卵子捐赠以及推迟生育等，还能避免胚胎冷冻所涉及的宗教和伦理道德问题。

冷冻保存技术的基本原理和方法

1. 传统缓慢降温法
   • 冷冻保护剂的作用
     • 在胚胎和卵母细胞的冷冻保存过程中，防止冰晶形成和有毒溶质浓度过高是关键，这两者是导致细胞死亡的主要原因。为了实现这一点，细胞悬浮的冷冻溶液中需要添加冷冻保护剂（CPA）。CPA 分为细胞内 / 膜渗透性（如丙二醇、二甲基亚砜、甘油、乙二醇等）和细胞外 / 膜非渗透性化合物（如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、蛋白质、脂蛋白等）。渗透性 CPA 通过渗透梯度置换水分，部分占据细胞内水的位置，而非渗透性 CPA 则增加细胞外渗透压，在冷冻前支持细胞脱水，解冻后防止水分快速进入细胞。
   • 不同阶段的处理
     • 对于人类胚胎和卵母细胞，在缓慢降温前，通常会让其暴露于渗透性和非渗透性 CPA 的混合物中 10 分钟进行脱水。对于早期卵裂阶段的胚胎和卵母细胞，常用低浓度的丙二醇（1.5M）和蔗糖（0.1 - 0.25 - 0.5M），而囊胚阶段的胚胎则常用甘油。以最初成功的小鼠和牛胚胎冷冻保存协议为例，是将胚胎以 - 0.3°C - 0.5°C/min 的缓慢降温速率冷却到 - 80°C - 120°C，但这个过程很长（几个小时）。后来有了改进的方法，如将绵羊和牛胚胎以 0.3°C/min 的速率缓慢冷却到 - 30 - 35°C 后，再浸入液氮中，大大缩短了冷冻过程（1.0 - 1.5 小时）。人类胚胎一般是以 0.3°C/min 的低冷却速率冷却到约 - 30°C - 40°C，然后以 - 50°C/min 的速率增加冷却到 - 80°C - 150°C 后再浸入液氮中。在缓慢降温过程中，手动在 5 到 - 8°C 之间诱导冰晶成核（播种），缓慢冷却到 - 30°C - 40°C 后再快速冷却到 - 196°C 的胚胎 / 卵母细胞，需要在 25°C - 37°C 的温水中快速解冻，然后逐步去除 CPA 进行细胞再水化。
2. 玻璃化（超快速冷冻保存）法
   • 技术原理
     • 玻璃化是一种不同于缓慢降温的冷冻保存方法，它是在低温下通过极端提高粘度使溶液固化，避免冰晶在细胞内和细胞外空间形成。这是通过高浓度的 CPA（4 - 8mol/L）和极高（超快速）的冷却速率实现的。在玻璃化过程中，细胞主要在超快速冷却开始前通过暴露于高浓度的 CPA 进行脱水，以获得玻璃化的细胞内和细胞外状态。但玻璃化过程中 CPA 的高浓度可能对细胞有毒性，不过可以通过混合不同的 CPA 来降低每种 CPA 的相对浓度，并将胚胎 / 卵母细胞暴露于溶液的时间减到最少来控制毒性。
   • 操作要点
     • 用于玻璃化的冷冻溶液由渗透性（如 EG、G、DMSO、PG、乙酰胺等）和非渗透性（如蔗糖、海藻糖等）试剂组成，有些协议还会补充大分子物质如聚乙二醇等。为了提高冷却速率，胚胎 / 卵母细胞玻璃化的溶液体积已被大幅减小（0.1 - 2μL），并开发了特殊的载体系统，如开放式拉伸吸管、Flexipet - 剥脱移液器、Cryotop 等。玻璃化技术操作难度较大，因为胚胎 / 卵母细胞必须在极短时间（<1min）内处理非常浓缩、粘稠且体积小的玻璃化溶液，所以操作人员需要经过良好的培训。

人类胚胎和卵母细胞冷冻保存的实践经验及安全性

1. 胚胎冷冻保存的实践经验
   • 不同阶段的效果
     • 对于人类胚胎冷冻保存，早期卵裂阶段胚胎解冻后至少保留一半初始卵裂球被认为是存活的。在一项大型多中心研究中，14000 个早期卵裂阶段缓慢冷冻和解冻的胚胎中，73% 的胚胎至少有一半初始卵裂球仍然完整，移植后的临床妊娠率和着床率分别为 16% 和 8.4%。对于囊胚冷冻保存，常用甘油和蔗糖的组合作为冷冻溶液，报道的内细胞团和滋养层细胞至少 50% 存活的存活率在 69% - 98% 之间，着床率在 16% - 30% 左右。早期卵裂阶段人类胚胎已成功在多种基于 DMSO、EG 等的溶液中玻璃化，存活率约 60% - 80%，且有多个妊娠 / 分娩案例。囊胚玻璃化常用 EG 和 DMSO 的混合物作为溶液，报道的总体存活率在 70% - 99% 之间，着床率在 20% - 50% 左右。
   • 不同方法的比较
     • 在一些比较研究中，发现玻璃化和缓慢降温在胚胎存活和着床率方面各有优劣。例如，在某些情况下玻璃化的卵裂阶段和囊胚阶段胚胎解冻后存活率较高，但在有经验的群体中，玻璃化并不比缓慢降温有更高的怀孕概率。
2. 卵母细胞冷冻保存的实践经验
   • 不同方法的影响
     • 在缓慢冷冻卵母细胞方面，提高蔗糖浓度（从 0.1M 到 0.3M）可以提高脱水率以及 MII 卵母细胞的存活率和受精率。改变 CPA 的平衡温度、冰晶成核和将胚胎浸入液氮的操作，以及用胆碱替代钠或直接向卵母细胞细胞质中注射蔗糖等方法都能提高卵母细胞的存活率。但缓慢冷却的卵母细胞相对于新鲜对照组发育较慢。在玻璃化卵母细胞方面，常用的玻璃化溶液由渗透性（2.7M EG 和 2.1M DMSO）和非渗透性 CPA（0.5M 蔗糖）组成，改进的玻璃化技术提高了玻璃化人类卵母细胞解冻后的存活率和受精率，与新鲜对照卵母细胞相当。

参考文献：Konc J, Kanyó K, Kriston R, Somoskői B, Cseh S. Cryopreservation of embryos and oocytes in human assisted reproduction. Biomed Res Int. 2014;2014:307268. doi: 10.1155/2014/307268. Epub 2014 Mar 23. PMID: 24779007; PMCID: PMC3980916.