混合性结缔组织病（MCTD）是一种自身免疫性疾病，其诊断主要依赖于临床表现和实验室检查。对于有雷诺现象、关节痛或关节炎、肌痛、手肿胀等症状的患者，如果同时存在高滴度斑点型ANA和高滴度抗u1RNP抗体阳性，而抗Sm抗体阴性，则应考虑MCTD的可能性。高滴度抗u1RNP抗体是诊断MCTD的必要条件之一。如果抗Sm抗体阳性，则应首先考虑系统性红斑狼疮（SLE）。

目前尚无MCTD的美国风湿病学会（ACR）诊断标准，但Alarcon-Segovia（1986年）和Kahn（1991年）提出的两个诊断标准被认为是敏感性和特异性最高的。MCTD的诊断还需要与其他弥漫性结缔组织病如SLE、系统性硬化症（SSc）、多发性肌炎（PM）和类风湿关节炎（RA）等进行鉴别诊断。

在临床实践中，MCTD可能会表现出与其他结缔组织病相似的症状，甚至可能在某一时期以某种疾病的症状为主，另一个时期又以其他疾病的症状为主。因此，对于已确诊为MCTD的患者，仍需要密切观察病情的发展。

除了与其他结缔组织病鉴别诊断外，MCTD还需要与其他重叠综合征如未分化结缔组织病（UCTD）、硬皮病重叠综合征和肌炎重叠综合征等进行鉴别诊断。对于仅表现出一两个可疑的临床和实验室特征的患者，可能需要进行更长时间的观察和随访，以确定最终的诊断。