患者朋友们您们好，胆囊癌是临床上最常见的胆道恶性肿瘤之一。据统计女性的发病率明显高于男性，大约是男性 3 倍左右。胆囊癌的预后往往欠佳，需要尽早手术治疗，同时辅助综合治疗以便取得较好效果。

目前研究，针对胆囊癌的发病原因还没有完全阐述清楚。但是，发生胆囊癌的高危因素目前发现很多，我们一起来分析一下。

• 胆囊结石：目前统计发现，胆囊癌患者大约 80%合并胆囊结石，胆囊结石越大其发生胆囊癌变的几率越高，其中大于 3 厘米以上的结石或者填满性结石其发生胆囊癌变的几率越是胆囊小结石患者的 2-3 倍左右。胆囊结石通过长久的反复刺激，摩擦胆囊内粘膜，尤其反复发作急性胆囊炎的患者，胆囊壁会明显增厚，胆囊粘膜受损明显，同时受损的胆囊粘膜会分泌有害粘液样分泌物，诱发胆囊癌的形成。
• 胆肠吻合术：患者由于其他疾病行胆管和空肠吻合改道手术。这会造成碱性肠液以及肠道内的大肠杆菌反流入胆管和胆囊内，长时间的刺激会导致胆囊粘膜癌变。
• 胆囊腺瘤：胆囊腺瘤属于胆囊息肉样病变的一种，目前证实这是胆囊癌的癌前病变。另外，胆囊息肉大于 1 厘米，基地部较宽，合并胆囊结石，息肉单发，60 岁以上女性，胆囊颈部息肉等等均是胆囊癌变的高危因素。

以上就是关于胆囊癌病因的相关内容，欢迎大家留言讨论交流。

患者朋友们大家好，胆囊恶性肿瘤的发病率呈现逐年增加的趋势，由于很多患者早期多没有明显的临床症状，一旦发现肿瘤性病变多处于中晚期，丧失手术的最好时机。很多患者带着疑问选择了放疗治疗，那么放疗的效果如何，有什么副作用吗，今天我们一起讨论一下。

一般来说，胆囊癌的首选效果最好的治疗还是手术治疗，放疗治疗的总体效果欠佳，而且常见很多副作用。主要表现有以下几点：

• 胃肠道反应，放射治疗会引起患者出现食欲明显减退，恶心，呕吐，腹胀，腹痛表现，放射性引起的损伤往往不容易短时间内恢复。需要较长的时间规律饮食，服药缓慢恢复。
• 放射性皮肤炎症，接受放射部位的皮肤会有疼痛，红肿，脱皮表现，随着放射治疗时间延长会有色素沉着，皮肤纤维瘢痕增生的情况出现。这时需要尽早用药治疗，以免引起进行性加重的感染。
• 神经系统的损伤，放射性损伤会导致颅脑水肿，继发性颅内高压，患者出现恶心，呕吐，头痛，嗜睡，甚至昏迷的情况出现。
• 免疫系统的损伤，放射线会造成机体免疫系统破坏，患者容易出现感冒，全身高热，寒战等感染，病毒感染等情况。

以上就是关于胆囊癌患者接受放射性治疗可能会出现的相关副作用。患者朋友们欢迎您随时给我留言，我尽量帮你分析解答。

患者朋友们大家好，今天和大家一起学习的科普话题是胆囊癌的手术方式有哪些。胆囊恶性肿瘤是临床上常见肿瘤性病变之一。目前对于胆囊癌的分期不同，手术方式也有差别。临床上常用的胆囊癌手术方式有以下几种：

1.仅行胆囊切除，若是胆囊癌细胞仅仅侵犯胆囊粘膜下层，没有肌层侵犯，没有淋巴结转移，这种情况下胆囊切除就可以完整切除肿瘤，术中一定要主要不要切破胆囊壁。

2.胆囊癌细胞侵犯到胆囊肌层甚至是胆囊浆膜层伴有淋巴结转移，这种情况下需要切除胆囊，同时肝脏部分楔形切除，肝脏切缘距离胆囊至少 2 厘米以上。术中可送肝脏切缘快速病理检查，确保肝脏切缘没有癌细胞残留。同时对于肿大的淋巴结进行轻松。

3.右半肝切除，对于胆囊癌侵犯右侧肝组织患者，局部切除胆囊达不到治疗肿瘤的目的，需要扩大切除范围，右半肝切除是比较常用手段，部分患者肿瘤侵犯右半结肠还需要行侵犯结肠切除，远端结肠封闭，近端结肠造瘘可能。

4.对于胆囊癌晚期，肿瘤细胞在腹腔及肝内广泛侵犯，没有手术切除机会的情况下可考虑做胆管空肠吻合，解除胆道梗阻的情况。或者可考虑行胆管支架置入避免梗阻性黄疸造成的肝功能衰竭。

以上就是今天的内容，欢迎大家关注我，可以给我留言，我竭诚为您服务。

       隐匿性胆囊癌是指在患者因胆囊结石或胆囊息肉等疾病，行胆囊切除术，术后病理结果提示胆囊癌性肿瘤。这种情况，往往术前的常规检查并有发现胆囊恶性肿瘤，术中操作也没有发现胆囊明显异常，属于胆囊癌的早期。那么发现隐匿性胆囊癌后应该如何根治呢，下面我们大家一起来学习一下。

       隐匿性胆囊癌的根治主要以术后的病理切片结果为依据，可以分为以下几种类型：

       1，如果胆囊恶性肿瘤细胞仅局限在胆囊的粘膜，并没有突破胆囊肌层以及浆膜。手术切除的过程中胆囊并没有破裂，术中没有发现异常的淋巴结肿大，术后也没有发现淋巴结转移。这种情况下，理论上达到了隐匿性胆囊癌的根治效果，患者不需要再次行手术治疗，每3~6个月复查胆囊彩超或磁共振即可。         2，术后病理结果提示胆囊恶性肿瘤侵犯胆囊肌层或浆膜，或伴有胆囊三角区淋巴结侵犯。这种情况，必须要进行二次手术，部分肝脏的楔形切除，并尽可能地清扫肝门部的淋巴结。避免恶性肿瘤细胞的残留，依据二次术后病检结果决定是否行放化疗治疗。

       隐匿性胆囊癌的发病相对较低，因为胆囊恶性肿瘤早期可没有明显的临床症状，所以大部分胆囊癌的患者，一旦发病均属于中晚期。但是隐匿性胆囊癌分期较早，手术根治率高，预后明显较好。

胆囊癌是一种侵袭性很强的恶性肿瘤。具有淋巴结转移早、可直接浸润肝组织、易发生腹腔种植和血型转移的特点。其死亡率很高，五年生存率小于 5%。平均生存期为 5 到 8 个月，因远期疗效差于肝癌及胰腺癌是名副其实的癌中之王。然而，确诊胆囊癌，并非不治之症，积极治疗，仍然可以获得治愈。下面介绍一个我们亲自诊疗的病例：

1、老年女性患者，69 岁，隐匿性病程，右下腹疼痛 16 天。

2、现病史：患者于 16 天前无明显诱因出现右下腹疼痛，性质为持续酸疼，无伴放射痛，无发热，无恶心呕吐，无腹泻等，遂于当地医院就诊，行 B 超示未见明显异常，予口服抗炎药治疗，症状未见缓解。5 天前患者再于当地医院行腹部 CT 检查，结果示： 1、胆囊壁局限性增厚，考虑胆囊 Ca 可能性大，2、肝右叶钙化灶。腹部 B 超示： 1、肝内钙化灶；2、胆囊内低回声；3、胆囊壁粗糙。建议进一步检查及治疗。现患者为进一步检查并行手术治疗收入我科。患者自患病以来，精神可，睡眠可，胃纳可，二便正常，近期体重未见明显下降。

3、查体：腹平坦，无腹壁静脉曲张，腹部柔软，无压痛、反跳痛，腹部无包块。肝脏未触及，脾脏未触及，Murphy 氏征阴性，肾脏无叩击痛，无移动性浊音。肠鸣音正常，4 次/分。

4、2017 年 04 月 15 日 CT 1、胆囊壁局限性增厚，考虑胆囊 Ca 可能性大，2、肝右叶钙化灶。

2017 年 04 月 16 日 B 超 1、肝内钙化灶；2、胆囊内低回声；3、胆囊壁粗糙。

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术前核磁和增强核磁都确认高度怀疑胆囊癌，仔细分析核磁后，我们发现肿瘤没有侵透胆囊浆膜，决定为她施行微创胆囊+肝 V 段部分切除、肝十二指肠韧带淋巴结清扫术。术中发现，胆囊肿瘤未侵犯浆膜，于是按计划，我们进行了腹腔镜胆囊+肝 V 段部分切除、肝十二指肠韧带淋巴结清扫术。术后恢复顺利，术后第五天顺利出院。

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术后我们为其进行了一年的化疗、免疫加中医药治疗，复查未见肿瘤复发。

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诊断胆囊癌并不可怕，配合治疗，仍然有治愈的可能。如果放弃治疗，耽误病情，甚至错过手术机会，才是最可怕的。胆囊癌的手术方式一般是要根据病人胆囊癌的分期分型来进行。胆囊的原位癌就是早期就局限于黏膜的，只把胆囊切除就够。如果胆囊癌侵犯到肌层这种情况，还需要看它的部位，要是位于胆囊床的就需要切除 2-3cm 的肝组织。如果不位于胆囊床可做胆囊切除，再加上肝十二指肠韧带淋巴结清扫就可以。淋巴结清扫包括肝十二指肠韧带，胆总管、门静脉、肝动脉这三大管道以外的软组织、包括肝总管周围的淋巴结也应该做相应的切除。如果达到了 IV 期，有相应的临近器官的受侵的话，也需要做临近器官的切除，如癌肿侵犯横结肠，可加做横结肠切除术，如侵犯胆总管下段，加做胰十二指肠切除。

北京医院 普通外科 刘燕南 主任医师、副教授

门诊时间：周二上午、周五上午

临床上胆囊癌根据浸润深度、周围脏器转移情况、淋巴结转移情况，往往分为四期，I 期胆囊癌为第一期，表示胆囊癌局限在胆囊粘膜层，没有或很少有转移。这一期患者的手术效果非常好；II 期胆囊癌为第二期，表示胆囊癌已经侵犯到胆囊壁全层，可能已经有附近的转移。这一期患者接受手术后有 20-30%的概率会生存至 5 年以上；III 期胆囊癌为第三期，表示胆囊癌已经突破胆囊包膜，侵犯到胆囊外，或侵犯到肝脏、胆管、十二指肠等附近的器官，并且有附近的淋巴结转移，这一期患者中的一部分还能接受外科切除手术，但总体治疗效果不好，很少部分患者能生存至 5 年以上；IV 期胆囊癌为第四期，表示胆囊癌已经发生全身性扩散，病人的生存时间很少超过一年。所以当病人被诊断为胆囊癌后，这时的临床分期与治疗选择和病人的预期生存时间有密切的关系。

今天给大家分享一例 III 期胆囊癌患者病历，看看是如何获得长期存活的：

• 中年女性，60 岁，病程 1 周。
• 患者 1 周前无明显诱因偶发左侧肩胛下疼痛 1 次，无恶心、呕吐、发热，无腹痛、腹胀、腹泻，无心悸、胸痛、憋气，无大小便性状改变。就诊我院门诊。查腹部 MRI 结果提示：胆囊稍大，形态及位置未见异常，边缘光整，胆囊壁稍厚，胆囊底部可见不规则结节影，凸向腔内生长，大小约 2.1×2.7cm， T1WI 等信号，T2WI 高信号，DWI 高信号。诊断考虑胆囊癌可能，腹腔内及腹膜后多发小淋巴结；脂肪肝。
• 既往史：脂肪肝，眩晕病史，胆管结石切开取石术后 5 年，绝育术后。
• 查体：体温： 36.3℃，脉搏： 72 次/分，呼吸： 18 次/分，血压： 138/80mmHg。
• 辅助检查：腹部 MRI： 胆囊癌可能，腹腔内及腹膜后多发小淋巴结；脂肪肝。

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术前 CT、MRI 高度怀疑胆囊癌，考虑肿瘤突破包膜，决定为患者施行开腹胆囊癌根治，胆囊+肝 V 段部分切除+淋巴结清扫。术后第一天下地活动饮水、第二天进食，术后由于伤口脂肪液化，多住了几天，术后 14 天顺利恢复出院。术后经过免疫治疗、化疗一年，目前随访已近 3 年，无肿瘤复发。

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根治性切除手术是唯一可能治愈胆囊癌的方法。胆囊癌的外科治疗涉及肝脏部分切除、联合器官切除或联合血管切除重建、淋巴结清扫、肝外胆管处理、胆囊管癌处理等等一系列复杂的判断和处理，建议在具有经验丰富的肝胆胰外科医师和病理科医师的医疗中心完成。术后建议根据病理、分期，进行化疗、靶向、免疫治疗，有时候晚期患者还要接受放射治疗。

胆囊癌患者术后，应该详细记录流行病学、临床分期、病理学类型、手术方式、化疗、靶向治疗、免疫治疗、放疗、肿瘤复发、随访终止时间及原因等，以便于随访。胆囊癌患者根治性切除术后建议 1 年内每 3 个月复查一次，1 年后每 6 个月复查一次；胆囊癌根治性术后需辅助治疗或胆囊癌姑息治疗的患者，应按治疗周期接受治疗和随访。

北京医院 普通外科 刘燕南 主任医师、副教授

门诊时间：周二上午、周五上午

冻卵，受到了越来越多的关注。但你对冻卵女性了解有多少？她们年龄多大？冻卵后她们又如何使用的？通过1篇荟萃分析我们来一起揭秘。

一、研究方法

研究人员按照系统综述和荟萃分析的首选报告项目（PRISMA）建议进行了系统综述。他们搜索了 PubMed、Scopus 和 Web of Science 从建库到 2021 年 1 月的文献，对发表日期没有限制。纳入的研究需为英文，且研究了计划性冻卵的使用者或潜在使用者的特征、最初信息来源以及卵子处置情况。提取的数据通过主题分析进行分析，纳入研究的方法学质量使用 QualSyst 标准进行评估。

二、研究结果

1. 研究筛选情况
   • 最初检索到 1074 条记录，其中 29 项研究符合纳入标准，包括 12 项定性研究和 17 项定量研究。调查的回复率在 38% - 85% 之间。
2. 女性特征
   • 计划性冻卵的使用者或潜在使用者大多为单身、受过高等教育、有工作，平均年龄为 37 岁。
3. 信息来源
   • 媒体和朋友是计划性冻卵最初知识的最常见来源，而健康专业人员则是较不常见的来源。
4. 卵子使用情况
   • 大多数计划性冻卵者没有尝试使用冷冻卵子怀孕，但她们并不后悔进行了该过程。

三、讨论与启示

1. 人口特征与卵子使用
   • 计划性冻卵的大多数使用者或潜在使用者具有特定的人口统计学特征，并且最终大多没有使用她们冷冻保存的卵子。这可能是由于多种原因，比如在冻卵后的生活中，她们的生育计划发生了改变，或者虽然有生育的想法但尚未尝试使用冷冻卵子。
2. 卵子处置的选择
   • 对于未使用的卵子，存在多种处置方式。可以选择丢弃，这可能是因为女性认为自己不再需要这些卵子，或者缺乏合适的使用途径。也可以选择捐赠给其他女性，为那些有生育困难的女性提供帮助。此外，还可以捐赠给研究机构，用于相关的科学研究，以推动生育医学的发展。
3. 对健康专业人员的指导意义
   • 了解计划性冻卵潜在使用者的主要特征，健康专业人员可以更加主动地宣传正确的冻卵知识，包括冻卵的风险、成功率以及后续可能面临的问题等。同时，在咨询过程中，也可以根据女性的年龄、婚姻状况和生育计划等因素，提供更加个性化的建议，帮助她们做出更有效的决策。

参考来源：Giannopapa M, Sakellaridi A, Pana A, Velonaki VS. Women Electing Oocyte Cryopreservation: Characteristics, Information Sources, and Oocyte Disposition: A Systematic Review. J Midwifery Womens Health. 2022 Mar;67(2):178-201. doi: 10.1111/jmwh.13332. Epub 2022 Feb 13. PMID: 35156301.

原始卵泡位于卵巢皮质中，处于静止状态。其数量在出生时就已确定（每个卵巢大约 60 万到 100 万个），并在儿童期和整个生育期持续逐渐减少，因为原始卵泡会被募集并离开静止状态。

大多数原始卵泡在初次募集后发生闭锁，无法达到窦状卵泡阶段，只有少数能继续生长直至排卵，在生育期大约排卵 450 次左右，只有极少数卵泡能发育成有受精能力的卵子。当原始卵泡几乎耗尽，只剩下大约 1000 个原始卵泡时，就会导致绝经。

随着女性生育观念的转变以及医学技术的飞速发展，冻卵技术作为一种生育力保存的手段，正逐渐走进大众的视野。这一技术为女性在面临生育挑战时提供了一种可能的解决方案，无论是因为职业发展、个人生活规划，还是由于疾病治疗等原因导致的生育延迟或生育风险增加。

一、冻卵技术的原理与方法

冻卵技术的核心原理是在极低的温度下保存卵子，使其代谢活动几乎停止，从而延长卵子的存活时间。目前主要有两种常见的冻卵方法：慢冻法和玻璃化冷冻法。

慢冻法是一种较为传统的方法，它通过逐步降低温度，让卵子在这个过程中逐渐适应低温环境。在这个过程中，会使用一些冷冻保护剂来减少冰晶的形成，因为冰晶可能会对卵子的结构造成损伤。具体来说，卵子首先在含有一定浓度冷冻保护剂的溶液中进行预处理，然后以相对缓慢的速度降温，经过多个阶段的温度调控，最终将卵子储存于液氮中，温度可达 -196°C。

玻璃化冷冻法则是一种更为先进的技术，它能够在更短的时间内实现卵子的冷冻。这种方法使用了更高浓度的冷冻保护剂，并且通过极快的冷却速度，使卵子在瞬间从液态转变为一种类似玻璃的固态，从而避免了冰晶的形成。玻璃化冷冻法在保护卵子的结构和功能方面具有一定的优势，因此近年来受到了越来越多的关注和应用。

二、冻卵技术的适用人群与临床应用

1. 癌症患者的生育力保存 对于许多癌症患者，尤其是年轻女性，化疗、放疗等治疗手段可能会对卵巢功能造成不可逆的损害，导致生育能力丧失。冻卵技术为这些患者提供了在接受治疗前保存生育能力的机会。例如，在一些血液系统癌症或生殖系统癌症的治疗中，医生会建议患者在开始治疗前考虑冻卵。通过采集卵子并进行冷冻保存，患者在治愈癌症后，如果有生育的意愿，就有可能使用这些冷冻的卵子尝试受孕。
2. 延迟生育的女性 随着社会的发展，越来越多的女性选择在事业有成之后再考虑生育问题。然而，女性的生育能力会随着年龄的增长而逐渐下降，尤其是在 35 岁之后，这种下降趋势更为明显。冻卵技术为这些希望延迟生育的女性提供了一种保障。她们可以在年轻、生育能力较强的时候将卵子冷冻保存，等到合适的时机再尝试受孕。

三、冻卵技术的临床效果与影响因素

1. 卵子的存活率和受精率 冻卵技术的临床效果受到多种因素的影响。从卵子的存活率和受精率来看，不同的研究报道结果有所差异。一般来说，玻璃化冷冻法在卵子存活率和受精率方面可能表现出一定的优势。一些研究显示，玻璃化冷冻法的卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右；而慢冻法的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率在 60% - 70% 左右。然而，这些数据并不是绝对的，实际的存活率和受精率还会受到卵子本身的质量、冷冻保护剂的使用、冷冻和解冻的操作过程等多种因素的影响。
2. 怀孕率和活产率 冻卵后的怀孕率和活产率也是衡量技术效果的重要指标。随着技术的不断发展，冻卵后的怀孕率和活产率也在逐步提高。例如，慢冻法的活产率从早期的较低水平逐渐上升，从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 20，02 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2004 年之前的 29.4% 提高到 2004 年之后的 39%。但需要注意的是，怀孕率和活产率还与女性的年龄、身体状况、受孕环境等多种因素密切相关。

冻卵技术作为一种新兴的生育力保存手段，为女性的生育选择提供了更多的可能性。然而，我们也应该清醒地认识到，这项技术仍然处于不断发展和完善的过程中，面临着诸多技术挑战和伦理法律问题。只有通过不断的研究和探索，才能使冻卵技术更好地服务于女性的生育健康，为更多女性实现生育梦想提供有力的支持。

参考文献：Cacciottola L, Donnez J, Dolmans MM. Ovarian tissue and oocyte cryopreservation prior to iatrogenic premature ovarian insufficiency. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2022 May;81:119-133. doi: 10.1016/j.bpobgyn.2021.09.010. Epub 2021 Nov 15. PMID: 34887172.

在当今社会，女性面临着多种可能影响生育能力的因素，如癌症治疗、延迟生育等。因此，生育力保存成为了一个重要的研究领域，而冻卵技术作为其中的一种方法，正逐渐受到关注。其目的在于为面临生育风险的女性提供一种保存生育能力的选择，以便在未来需要时能够实现生育梦想。

冻卵技术的原理

为了长期保存细胞的活性，需要将细胞置于极低的温度下，使其进入一种类似于 “暂停生命活动” 的状态。对于哺乳动物细胞来说，通常使用的储存温度是 -196°C（液氮的温度）。在这个温度下，水呈固态，生物反应停止，对冻存细胞的主要威胁被认为是背景辐射对 DNA 造成的损伤。

然而，冻卵过程中最关键的是要避免在温度变化过程中对卵子造成损伤。当水冷却到冰点以下时会形成冰晶，冰晶的体积比液态水大，会对细胞内的细胞器造成压力和剪切力，导致细胞受损。因此，避免冰晶形成是成功冻卵的首要目标。此外，随着水的冻结，溶质被排除在固体之外，会使剩余未冻结溶液的溶质浓度升高，对细胞内蛋白质产生毒性，避免这种溶液效应是第二个目标。在解冻过程中，如果升温缓慢，会有自由水解冻和再结晶的危险，而快速升温则可能导致细胞外渗透压突然下降，引起自由水快速流入细胞，造成细胞肿胀和损伤，即渗透压冲击，避免这种情况是第三个目标。

为了实现这些目标，所有成功的冻卵方法都使用了一种叫做冷冻保护剂的化学物质。冷冻保护剂分为渗透性和非渗透性两类。渗透性冷冻保护剂是小分子物质，能够穿透细胞膜，与水分子形成氢键，防止冰晶形成，并在一定浓度下可使水形成玻璃化状态（一种固态但不膨胀的状态）。常用的渗透性冷冻保护剂有丙二醇（PROH）等。非渗透性冷冻保护剂则留在细胞外，通过从细胞内吸取自由水来使细胞内空间脱水，从而增加渗透性冷冻保护剂在细胞内的浓度，进一步协助防止冰晶形成。在解冻过程中，非渗透性冷冻保护剂还可以防止因细胞内冷冻保护剂不能快速扩散出去而导致的渗透压冲击，常用的非渗透性冷冻保护剂有蔗糖等。

冻卵的方法

1. 慢冻法（Slow - Freeze）
   • 慢冻法在卵子仍处于代谢状态时使用较低的初始冷冻保护剂浓度，以降低毒性。冷冻保护剂通常在室温下添加，然后温度逐渐降低（约 2°C/min）到 -6°C 的播种温度。在这个温度下，通过用冰冷的器械触碰冻存容器的外部，引入一个小冰晶作为种子，诱导溶液中的冰晶形成。然后溶液在这个温度下保持一段时间（如 10 - 30 分钟）以达到平衡，之后温度再逐渐降低到 -32°C。在这个过程中，冰晶在细胞外介质中逐渐生长，冷冻保护剂浓度逐渐增加，特别是在细胞内空间，通过非渗透性冷冻保护剂进一步脱水。最后将冷冻容器投入液氮中。
   • 在解冻时，为了防止冰晶再结晶，需要快速升温，但要注意避免渗透性冷冻保护剂在细胞内高浓度引起的渗透压冲击，因此需要使用额外的非渗透性冷冻保护剂。随着渗透性冷冻保护剂逐渐从卵子中扩散出来，非渗透性冷冻保护剂的浓度逐渐降低，直到卵子被放回标准培养基中。
2. 快速冷冻法（Vitrification）
   • 快速冷冻法（玻璃化冷冻）在室温下向细胞中添加高浓度的渗透性冷冻保护剂，由于这种高浓度的冷冻保护剂毒性较大，卵子不能在这个温度下长时间停留。经过短暂的平衡后，卵子直接投入液氮中。为了进一步防止冰晶形成，使用极快的冷却速度。在解冻时，也需要极快的升温速度以防止冰晶再结晶。

冻卵技术的临床应用

1. 癌症患者的生育力保存
   • 对于新诊断出癌症且面临绝育治疗的女性来说，冻卵是一种保存生育能力的方法。化疗和放疗等癌症治疗方法可能会导致卵巢功能衰竭，而冻卵可以在治疗前进行。例如，卵巢皮质含有大量原始卵泡，可以通过腹腔镜采集卵巢皮质，然后进行冻存。或者也可以采集处于生发泡阶段的卵子进行冻存，尽管生发泡卵子的体外成熟技术还不太可靠。
   • 在癌症患者中使用冻卵技术也存在一些问题，如刺激卵泡和采集卵子所需的时间可能会延迟癌症治疗，而且对于患有全身性或播散性恶性肿瘤的患者，移植冻存的卵巢组织需要谨慎，因为可能存在残留的恶性细胞。
2. 延迟生育
   • 随着社会的发展，越来越多的女性选择延迟生育。由于年龄的增长会导致生育能力下降，冻卵为这些女性提供了一种在年轻时保存卵子的方法，以便在未来想要生育时使用。然而，目前对于冻卵技术在延迟生育方面的应用，还缺乏长期的数据，例如需要冻存多少卵子才能实现满意的怀孕率还不确定。
3. 伦理问题及其他应用
   • 冻卵技术为那些反对胚胎冷冻保存的夫妇提供了一种选择，也可以用于一些胚胎冷冻保存不合法的国家。此外，冻卵还可以用于卵子捐赠，通过冻存捐赠者的卵子，可以解决传统卵子捐赠中存在的一些问题，如捐赠者的可用性、成本、同步捐赠者和接受者的日程安排等。

冻卵技术的临床结果

1. 存活率和受精率
   • 不同的研究报道了不同的卵子存活率和受精率。例如，一些研究使用慢冻法报道的卵子存活率在 50% - 70% 左右，受精率 60% - 70% 左右；而使用玻璃化冷冻法报道的卵子存活率和受精率可能更高，如一些研究中卵子存活率可达 90% 以上，受精率也在 70% - 90% 左右。
2. 怀孕率和活产率
   • 从临床结果来看，冻卵后的怀孕率和活产率也在不断提高。慢冻法的活产率从 1996 - 2004 年的每移植 21.6% 提高到 2002 - 2004 年的 32.4%；玻璃化冷冻法的活产率和持续怀孕率从 2005 年之前的 29.4% 提高到 2005 年之后的 39%。同时，冻卵后的流产率也呈现出随着活产率提高而下降的趋势。

参考文献：Jain JK, Paulson RJ. Oocyte cryopreservation. Fertil Steril. 2006 Oct;86(4 Suppl):1037-46. doi: 10.1016/j.fertnstert.2006.07.1478. PMID: 17008147.

在人类辅助生殖领域，冷冻保存技术是一项非常重要的技术手段。它包括精子、胚胎和卵母细胞的冷冻保存。研究表明，精子和胚胎的冷冻保存已经成为常规操作，卵母细胞的冷冻保存也正逐渐在临床实践中得到更广泛的应用。

胚胎冷冻保存降低了新鲜胚胎移植的数量，提高了体外受精（IVF）周期的有效性。数据显示，同时进行新鲜胚胎和冷冻胚胎移植的女性，通过使用冷冻胚胎可获得额外 8% 的生育机会。卵母细胞冷冻保存相较于胚胎冷冻有更多优势，比如为因肿瘤治疗或慢性疾病面临生育力丧失风险的女性保存生育能力、用于卵子捐赠以及推迟生育等，还能避免胚胎冷冻所涉及的宗教和伦理道德问题。

冷冻保存技术的基本原理和方法

1. 传统缓慢降温法
   • 冷冻保护剂的作用
     • 在胚胎和卵母细胞的冷冻保存过程中，防止冰晶形成和有毒溶质浓度过高是关键，这两者是导致细胞死亡的主要原因。为了实现这一点，细胞悬浮的冷冻溶液中需要添加冷冻保护剂（CPA）。CPA 分为细胞内 / 膜渗透性（如丙二醇、二甲基亚砜、甘油、乙二醇等）和细胞外 / 膜非渗透性化合物（如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、蛋白质、脂蛋白等）。渗透性 CPA 通过渗透梯度置换水分，部分占据细胞内水的位置，而非渗透性 CPA 则增加细胞外渗透压，在冷冻前支持细胞脱水，解冻后防止水分快速进入细胞。
   • 不同阶段的处理
     • 对于人类胚胎和卵母细胞，在缓慢降温前，通常会让其暴露于渗透性和非渗透性 CPA 的混合物中 10 分钟进行脱水。对于早期卵裂阶段的胚胎和卵母细胞，常用低浓度的丙二醇（1.5M）和蔗糖（0.1 - 0.25 - 0.5M），而囊胚阶段的胚胎则常用甘油。以最初成功的小鼠和牛胚胎冷冻保存协议为例，是将胚胎以 - 0.3°C - 0.5°C/min 的缓慢降温速率冷却到 - 80°C - 120°C，但这个过程很长（几个小时）。后来有了改进的方法，如将绵羊和牛胚胎以 0.3°C/min 的速率缓慢冷却到 - 30 - 35°C 后，再浸入液氮中，大大缩短了冷冻过程（1.0 - 1.5 小时）。人类胚胎一般是以 0.3°C/min 的低冷却速率冷却到约 - 30°C - 40°C，然后以 - 50°C/min 的速率增加冷却到 - 80°C - 150°C 后再浸入液氮中。在缓慢降温过程中，手动在 5 到 - 8°C 之间诱导冰晶成核（播种），缓慢冷却到 - 30°C - 40°C 后再快速冷却到 - 196°C 的胚胎 / 卵母细胞，需要在 25°C - 37°C 的温水中快速解冻，然后逐步去除 CPA 进行细胞再水化。
2. 玻璃化（超快速冷冻保存）法
   • 技术原理
     • 玻璃化是一种不同于缓慢降温的冷冻保存方法，它是在低温下通过极端提高粘度使溶液固化，避免冰晶在细胞内和细胞外空间形成。这是通过高浓度的 CPA（4 - 8mol/L）和极高（超快速）的冷却速率实现的。在玻璃化过程中，细胞主要在超快速冷却开始前通过暴露于高浓度的 CPA 进行脱水，以获得玻璃化的细胞内和细胞外状态。但玻璃化过程中 CPA 的高浓度可能对细胞有毒性，不过可以通过混合不同的 CPA 来降低每种 CPA 的相对浓度，并将胚胎 / 卵母细胞暴露于溶液的时间减到最少来控制毒性。
   • 操作要点
     • 用于玻璃化的冷冻溶液由渗透性（如 EG、G、DMSO、PG、乙酰胺等）和非渗透性（如蔗糖、海藻糖等）试剂组成，有些协议还会补充大分子物质如聚乙二醇等。为了提高冷却速率，胚胎 / 卵母细胞玻璃化的溶液体积已被大幅减小（0.1 - 2μL），并开发了特殊的载体系统，如开放式拉伸吸管、Flexipet - 剥脱移液器、Cryotop 等。玻璃化技术操作难度较大，因为胚胎 / 卵母细胞必须在极短时间（<1min）内处理非常浓缩、粘稠且体积小的玻璃化溶液，所以操作人员需要经过良好的培训。

人类胚胎和卵母细胞冷冻保存的实践经验及安全性

1. 胚胎冷冻保存的实践经验
   • 不同阶段的效果
     • 对于人类胚胎冷冻保存，早期卵裂阶段胚胎解冻后至少保留一半初始卵裂球被认为是存活的。在一项大型多中心研究中，14000 个早期卵裂阶段缓慢冷冻和解冻的胚胎中，73% 的胚胎至少有一半初始卵裂球仍然完整，移植后的临床妊娠率和着床率分别为 16% 和 8.4%。对于囊胚冷冻保存，常用甘油和蔗糖的组合作为冷冻溶液，报道的内细胞团和滋养层细胞至少 50% 存活的存活率在 69% - 98% 之间，着床率在 16% - 30% 左右。早期卵裂阶段人类胚胎已成功在多种基于 DMSO、EG 等的溶液中玻璃化，存活率约 60% - 80%，且有多个妊娠 / 分娩案例。囊胚玻璃化常用 EG 和 DMSO 的混合物作为溶液，报道的总体存活率在 70% - 99% 之间，着床率在 20% - 50% 左右。
   • 不同方法的比较
     • 在一些比较研究中，发现玻璃化和缓慢降温在胚胎存活和着床率方面各有优劣。例如，在某些情况下玻璃化的卵裂阶段和囊胚阶段胚胎解冻后存活率较高，但在有经验的群体中，玻璃化并不比缓慢降温有更高的怀孕概率。
2. 卵母细胞冷冻保存的实践经验
   • 不同方法的影响
     • 在缓慢冷冻卵母细胞方面，提高蔗糖浓度（从 0.1M 到 0.3M）可以提高脱水率以及 MII 卵母细胞的存活率和受精率。改变 CPA 的平衡温度、冰晶成核和将胚胎浸入液氮的操作，以及用胆碱替代钠或直接向卵母细胞细胞质中注射蔗糖等方法都能提高卵母细胞的存活率。但缓慢冷却的卵母细胞相对于新鲜对照组发育较慢。在玻璃化卵母细胞方面，常用的玻璃化溶液由渗透性（2.7M EG 和 2.1M DMSO）和非渗透性 CPA（0.5M 蔗糖）组成，改进的玻璃化技术提高了玻璃化人类卵母细胞解冻后的存活率和受精率，与新鲜对照卵母细胞相当。

参考文献：Konc J, Kanyó K, Kriston R, Somoskői B, Cseh S. Cryopreservation of embryos and oocytes in human assisted reproduction. Biomed Res Int. 2014;2014:307268. doi: 10.1155/2014/307268. Epub 2014 Mar 23. PMID: 24779007; PMCID: PMC3980916.